[发明专利]一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法

摘要

本发明涉及一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法，包括配制CaCl₂水溶液和水杨酸乙醇溶液、菌丝液体培养、钙离子和水杨酸诱导、菌丝收集、菌丝三萜提取与检测。在灵芝液体发酵过程中加入钙离子和水杨酸进行诱导，能够显著提高灵芝菌丝中三萜的含量，菌丝的三萜含量达48.97 mg/g，比对照组高48.26%，有效提高灵芝的质量，而且操作方法简单、成本低。

主权项

1.一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法，其特征在于操作步骤如下：（1）配制CaCl₂水溶液和水杨酸乙醇溶液：用CaCl₂和无菌水配制10mM钙离子水溶液；用水杨酸和乙醇，配制150µM水杨酸乙醇溶液；（2）菌丝液体培养：用9mm打孔器从长满灵芝菌丝的平板上打出8块菌丝接入100 mL液体PDA中，28℃，150rpm摇床培养6‑7天，然后再静置培养5‑6天；所述液体PDA配方为：200 g马铃薯煮沸浸出液、20 g葡萄糖、加水定容到1000mL，121℃灭菌30min；（3）钙离子和水杨酸诱导：取步骤（1）的钙离子水溶液1‑5mL和水杨酸乙醇溶液0.5‑1.5mL，混匀，采用滤膜除菌法加入到步骤（2）已接种培养的PDA培养液中，28℃生化培养箱中诱导处理1‑2天；（4）菌丝收集：收集步骤（3）诱导处理后的菌丝，并除去接种块，用蒸馏水洗涤3‑5次，置于60℃烘箱中烘干至恒重；（5）菌丝三萜提取与检测：取步骤（4）烘干的菌丝用乙醇常温浸提2h后，150W超声0.5h，60℃旋转蒸干，用甲醇溶解定容，并采用香草醛‑冰醋酸法检测三萜含量。