[发明专利]采用LRS获取白细胞的方法及所获得白细胞在基础实验中的应用

摘要

本发明涉及一种采用LRS获取白细胞的方法及所获得白细胞在基础实验中的应用，该方法采用灭菌冲洗液、灭菌等渗液和灭菌冲洗液依序多次冲洗单采血小板白细胞滤器上的白细胞过滤装置，然后将各冲洗液回收后采用D-Hank’s液稀释并用Ficoll密度梯度离心法梯度分离，将所得白细胞粗品采用PBS缓冲液多次洗涤离心得到存活的大量白细胞。该方法在血小板单采结束后就可以处理白细胞滤器来避免白细胞减少，且操作简单省时、白细胞收集率高，为珍贵的白细胞资源回收利用又提供了一条简便的途径，此外所得的白细胞可直接替代直接自外周血分离所得的白细胞在免疫学、药理学、肿瘤学和血液学中的应用，在不影响临床供血的前提下，稳定可靠的建立了获得白细胞的新途径。

主权项

一种采用LRS获取白细胞的方法，其特征在于：对经血小板单采术后的单采血小板白细胞滤器在百级洁净区内进行包括如下步骤所述的操作：(1)使用D‑Hank’s液冲洗单采血小板白细胞滤器上的白细胞过滤装置3～4次，去除白细胞过滤装置上附着的血渍并将每次冲洗后所得的冲洗液收集在一起；(2)继续使用D‑Hank’s液冲洗经(1)处理后的单采血小板白细胞滤器上的白细胞过滤装置2～3次，每次30～35s，去除白细胞过滤装置上粘附的物质并将每次冲洗后所得的冲洗液收集在一起；(3)再次使用D‑Hank’s液冲洗经(2)处理后的单采血小板白细胞滤器上的白细胞过滤装置2～3次，将粘附其上的白细胞冲洗脱落，并将每次冲洗后所得的冲洗液收集在一起；(4)将(1)、(2)和(3)中收集到的冲洗后所得的冲洗液混合形成混合液并转移至无菌离心管中，采用D‑Hank’s液将上述混合液进行稀释，其中混合液与D‑Hank’s液的质量比为1:18～20；然后采用Ficoll密度梯度离心法按照1:2进行梯度分离，其中离心速率为1800～1900rpm，离心温度为37～37.5℃，离心时间为30～35min，离心过程结束后得到离心液体；(5)用吸管吸取(4)中得到的离心液体的中间白膜层，得到白细胞粗品，然后采用PBS缓冲液对该白细胞粗品进行洗涤，并采用常温下1200～1300rpm的转速离心5～6min后，弃去上清液，得到沉淀物；将该沉淀物再次使用PBS缓冲液进行洗涤离心后，得到的最终沉淀物为存活的白细胞。