[发明专利]牛樟树组织培养快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，包括外植体的采集和消毒、无菌试管苗的获得、试管苗繁殖培养、试管苗的生根培养、炼苗移栽等步骤。本发明得到的种苗健壮，成活率达到99.2%，满足市场对牛樟树的种苗的大量需求，有效解决牛樟树规模化育苗问题。

主权项

一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步骤：(1)外植体的采集和消毒：取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗后，移置于超净工作台上；在75％乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8‑1cm带一个腋芽的茎段；(2)无菌试管苗的获得：将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌试管苗；培养温度为26‑28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；分化培养基以WPM为基本培养基，添加植物激素包括：6‑苄基腺嘌呤2.0mg/L、吲哚丁酸0.1mg/L、激动素0.2mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；(3)试管苗繁殖培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽；培养温度为26‑28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭1g/L以及植物激素6‑苄基腺嘌呤2.5mg/L、吲哚丁酸0.3mg/L、灵发素0.1mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；(4)试管苗的生根培养：将步骤(3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根；培养温度为26‑28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮0.5g/L、活性炭1.0g/L以及植物激素：吲哚丁酸0.5‑1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、灵发素0.1mg/L；蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；(5)炼苗移栽：将步骤(4)获得的带根的3cm高试管苗炼苗5‑7d，用镊子取出试管苗，洗净根部的培养基，移栽置灭菌后的质量比：蛭石:泥炭土为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚进行管理。