[发明专利]一种濒危孑遗树种水松种子组培苗瓶外生根培养方法

摘要

本发明是一种濒危孑遗树种水松种子组培苗瓶外生根培养方法。将水松种子表面消毒后接种于MS培养基中，30d时50％种子发芽，取带1.5cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体，在培养基I中进行丛生芽诱导，诱导率达80％，切下新生的顶芽和带侧芽芽段，在培养基II中进行继代培养，获得继代芽，继代增殖系数7.5，反复切下继代芽顶芽和芽段，在培养基II中增殖扩繁，获得大量增殖继代芽。单个切下4‑6cm长顶芽，用含有500mg.L‑1的α‑萘乙酸溶液进行速蘸处理后，移栽至穴盘中瓶外生根，盖上塑料穴盘盖保湿。生根处理60d后，生根率达64％，生根苗移栽至营养钵，移栽成活率达95％。本方法简便易行，可以使瓶内难生根树种水松成功完成组培快速繁殖，可应用于大规模工厂化生产濒危孑遗树种水松，解决了水松试管无性繁殖问题。

主权项

一种濒危孑遗植物水松种子组培苗瓶外生根培育方法，其特征在于：包括外植体消毒、外植体启动培养、丛生芽诱导、继代增殖扩繁、组培苗瓶外生根、移栽营养钵培育，获得水松组培瓶外生根苗，其操作步骤如下：(1)外植体消毒：以水松饱满种子为外植体，冲洗干净后用消毒液进行消毒；(2)外植体启动培养：消毒过的水松种子接种于MS培养基中进行萌发培养，30d时50％的种子成功萌发出芽；(3)丛生芽诱导：截取带1.5cm下胚轴的无菌苗顶芽为外植体，在培养基I中进行丛芽诱导获得水松丛生芽；(4)继代增殖扩繁：将诱导出的丛生芽，单个切下丛生芽的顶芽和带侧芽芽段，接种到培养基II中进行增殖，获得继代芽，重复循环继代芽增殖的步骤，直至获得大量足够瓶外生根的继代芽；(5)组培苗瓶外生根：将单个切下生长健壮、高4‑6cm的继代芽，用含有200mg·L‑1，300mg·L‑1，500mg·L‑1的α‑萘乙酸溶液进行速蘸处理后，移植于装有瓶外生根基质的穴盘中，种植后盖上塑料穴盘盖保湿；(6)移栽到营养钵：待苗木生根后长势稳定时，移栽到营养钵，并按常规方法进行水肥及病虫害等育苗管理；步骤(3)所述的培养基I其原料组分为：MS培养基+ZT 0.1mg·L‑1+IBA 0.1mg·L‑1+卡拉胶9g·L‑1+蔗糖30g·L‑1，pH调至5.8；步骤(4)所述的培养基II其原料组分为：MS培养基+ZT 0.5mg·L‑1+IBA 0.3mg·L‑1+卡拉胶9g·L‑1+蔗糖30g·L‑1，pH调至5.8；步骤(2)‑(4)控制温度25±2℃，光照1500‑2000Lx，每日光照12h；步骤(5)瓶外生根基质其原料组分和体积配比为：泥炭土：珍珠岩＝5：1；移栽之前，移栽基质用高温的方法进行消毒，移栽时基质湿度保持在60‑70％；移栽后，用塑料穴盘盖覆盖，保持空气湿度在80‑90％；步骤(5)控制温度22‑29℃，光照5000‑6000Lx，每日光照12h。