[发明专利]一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法

摘要

本发明提供一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，根据中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜蛋白的特异性条带差异达到鉴别两者的目的。中蜂蜂蜜在样品处理后进行蛋白电泳，具有15.0 KDa大小蛋白条带，意蜂蜂蜜具有16.5 KDa大小蛋白条带，两者的掺和蜂蜜样品同时具有15.0 KDa和16.5 KDa两个蛋白条带。本发明通过区别不同蜂蜜的特定蛋白条带来达到鉴别目的，可以准确地鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜。本发明方法中目标蛋白在中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中稳定存在，不受蜜源、浓缩加工和货架期的影响。本发明方法设计合理简单，仪器常见，费用低廉，鉴别准确，也适用于一定比例意蜂蜂蜜掺入中蜂蜂蜜中的鉴定。

主权项

一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)蜂蜜中总蛋白的提取：分别称取中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜，各放于离心管中，各加无菌水，震荡混匀，离心机4℃条件下8000g/min离心，吸取上清液至新的离心管中，将上清液置于4℃冰箱预冷，加入无水乙醇，在冰水浴中温和搅拌，然后在4℃条件下离心，弃去上清液，沉淀加无菌水，搅拌混匀，后分装到离心管中置于‑80℃冰箱备用，来自不同蜂种的蜂蜜用不同标识标记；(2)样品蛋白浓度测定：用蛋白浓度测定试剂盒测定样品蛋白浓度；(3)蛋白样品的处理：分别取中蜂蜂蜜蛋白样品和意蜂蜂蜜蛋白样品于离心管中，各加入蛋白上样缓冲液，震荡混匀后95℃恒温金属浴变性10分钟；(4)聚丙烯酰胺凝胶的制备：采用的分离胶浓度为12％，浓缩胶为5％，胶条厚度1.5mm；(5)蜂蜜蛋白样的电泳：采用蛋白电泳分离系统，两种蛋白上样量均为200μg，初始电压为90V，蛋白进入分离胶后改为150V至电泳结束，并加入蛋白Marker以指示蛋白分子量大小；(6)胶条的处理：电泳结束后胶条放入固定液中固定1小时，中间更换一次固定液，固定完成后用考马斯亮蓝R‑250染液染色3小时，然后置于脱色摇床上脱色至条带清晰；(7)目标蛋白条带的识别：中蜂蜂蜜蛋白在15.0KDa、意蜂蜂蜜蛋白在16.5KDa有特异性条带，根据标准蛋白Marker指示，比对蜂蜜蛋白条带结果，达到鉴别目的。