[发明专利]胶原蛋白的分阶段混合诱导发酵方法

摘要

本发明公开了一种胶原蛋白的分阶段混合诱导发酵方法，属于蛋白工程技术领域，菌种的纯化与保藏、活化与扩培；摇瓶、种子罐的种子培养；发酵罐内菌体培养与甲醇驯化、初始诱导阶段与混合加大诱导阶段；发酵液后处理后，得到胶原蛋白。本发明采用诱导剂、低温、高动力的的混合加大诱导模式，与用单一阶段添加诱导剂进行诱导相比，菌体对碳源甲醇有更好的适应过程，生物量得到了进一步的积累，循序渐进，逐渐加大诱导强度，目标蛋白的产量大量提高；与单一用温度诱导的方式相比，保证了目标胶原蛋白的正确折叠，同时提高动力条件满足了菌体在诱导表达阶段对溶氧的大量需求，提高了目标胶原蛋白的表达产量，同时又不会造成菌体中毒现象的发生。

主权项

1.一种胶原蛋白的分阶段混合诱导发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌种的纯化与保藏、活化与扩培；(2)摇瓶、种子罐的种子培养；(3)发酵罐内菌体培养与甲醇驯化、初始诱导阶段与混合加大诱导阶段；甲醇驯化过程为：第一阶段加入甲醇，使发酵罐溶氧下降至16％‑20％，维持时间3‑4h，之后溶氧回升；第二阶段加入甲醇，使发酵罐内溶氧下降至15％‑20％，维持时间2‑3h；初始诱导阶段过程为：调节发酵罐内的温度为28℃，采用间歇式恒速流加甲醇，控制溶氧在18％‑22％，设置搅拌转速为650rpm，流量为1L/(L·min)罐压为0.05MPa并保持不变，待生物量达到240‑260g/L时此阶段结束；混合加大诱导阶段为：调整发酵罐内温度为25℃，将通气流量由1L/(L·min)提高至1.3L/(L·min)，罐压升高至0.07MPa‑0.09MPa，加大甲醇的流加速率以维持18％‑22％的溶氧，一直维持到发酵结束，菌体湿重维持恒定或下降幅度超过20g/L，此阶段结束；(4)将步骤(3)所得的发酵液后处理后，得到胶原蛋白。