[发明专利]一种氢化可的松生物催化转化率的快速检测方法

摘要

本发明涉及一种氢化可的松生物催化转化率的快速检测方法，利用发酵后的主产物氢化可的松、副产物表氢化可的松及底物RSA与浓硫酸反应显示不同颜色，根据朗伯比尔定律结合三维数据建模，通过可见光双波长检测，即可间接计算发酵液中氢化可的松的转化率。本发明操作简单快捷，测试时间短、试样用量小，容易实现并行操作，精确性高。重复性误差在10％以内；可检出氢化可的松的转化率在10％‑95％之间，检测方法操作简单快捷，单个样品的测试时间在20min之内，而薄层层析法及高效液相色谱法所需时间较长。

主权项

1.一种氢化可的松生物催化转化率的快速检测方法，其特征在于：步骤如下：⑴利用主产物氢化可的松、副产物表氢化可的松、底物17‑羟基孕甾‑4‑烯‑3,20‑二酮‑21‑醋酸酯遇浓硫酸反应显不同颜色的特性，使用乙酸乙酯将发酵液中成分萃取出来，加入浓硫酸，使其与硫酸发生反应，导致颜色发生相应变化；⑵先对HC/浓硫酸、EHC/浓硫酸、RSA/浓硫酸进行全波长扫描，得到HC/浓硫酸、RSA/浓硫酸的最大吸收峰值分别为474nm、535nm；⑶根据朗伯比尔定律结合三维数据建模二阶校正得出氢化可的松转化率的计算公式；通过singmapolt软件拟合成三维立体平面图；⑷通过测定发酵液中的成分与浓硫酸反应在可见光双波长下的OD值，即可计算出待测发酵液中氢化可的松的转化率。