[发明专利]灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备方法有效
申请号: | 201511014867.3 | 申请日: | 2015-12-31 |
公开(公告)号: | CN105648007B | 公开(公告)日: | 2020-08-25 |
发明(设计)人: | 王斌;王晓丽;赵玉勤;孙坤来 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋学院 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C07K7/06;A61P39/06 |
代理公司: | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人: | 吴秉中 |
地址: | 316022 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明公开了一种灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备方法,本发明以灰星鲨软骨为原料,通过总蛋白提取、丙酮分级沉淀、胰蛋白酶酶解得酶解液,酶解液采用超滤、离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到抗氧化肽Gly‑Glu‑Arg‑Glu‑Ala‑Asn‑Val‑Met,ESI‑MS测定分子量为905.00 Da;制备的高活性抗氧化肽具有较强的自由基清除活性和良好的脂质过氧化抑制作用,可以作为药品、保健食品或食品添加剂等进行开发。 | ||
搜索关键词: | 灰星鲨 软骨 蛋白 氧化 制备 方法 | ||
【主权项】:
灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)灰星鲨软骨总蛋白粗提物的制备:称取灰星鲨软骨切成小碎块,加入适量蒸馏水,在高速组织捣碎机中匀浆至糊状,将糊状的灰星鲨软骨浸于4~6倍体积的1.0 mol/L盐酸胍溶液中,于4 ℃下搅拌抽提36~48 h;提取液在4 ℃下以4000~6000 r/min离心15~25 min,弃残渣收集上清液;上清液继续在4 ℃、10000~12000 r/min离心15~25 min,取上清液用0.22 μm微孔滤膜过滤除去不溶性杂质;将滤液装入分子截留量为8 000的透析袋中,用pH值为7.6的Tris‑HCl缓冲液于4 ℃下透析24~48 h,透析袋内溶液即为灰星鲨软骨总蛋白粗提物;2)灰星鲨软骨丙酮分级沉淀蛋白的制备:取灰星鲨软骨总蛋白粗提物在冰浴下缓慢加入预冷丙酮至丙酮浓度为30%,在‑20 ℃下静置4~6 h后,于4 ℃、10000~12000 r/min高速离心20 min,取上清液,加入预冷丙酮至溶液最终丙酮浓度为60%,获得灰星鲨软骨60%丙酮沉淀蛋白,冻干,即为60%丙酮分级沉淀蛋白;3)灰星鲨软骨丙酮分级沉淀蛋白的酶解:取灰星鲨软骨60%丙酮分级沉淀蛋白按照料液比1g:3~5 mL溶于Tris‑HCl缓冲液(0.05mol/L,pH 7.5~8.5),按照60%丙酮分级沉淀蛋白重量的2.0~3.0%加入胰蛋白酶(1.9×104 U/g),于40 ℃酶解3~5 h,然后于90 ℃、10 min灭酶活,酶解液于4 ℃、10000~12000 r/min离心15~25 min,弃残渣收集上清液,得软骨蛋白酶解液;4)灰星鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备:将上述酶解液采用3 kDa超滤膜进行超滤处理,收集分子量小于3 kDa部分,冻干,得超滤酶解物;将超滤酶解物次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化,得抗氧化肽;其中,所述步骤1)中的盐酸胍溶液含0.02 mol/L MES和0.02 mol/L EDTA,pH值为7~8;所述步骤3)中的Tris‑HCl缓冲液为0.05mol/L,pH值为7.5~8.5;胰蛋白酶为1.9×104 U/g 。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江海洋学院,未经浙江海洋学院许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201511014867.3/,转载请声明来源钻瓜专利网。