[发明专利]含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法

摘要

本发明公开了一种含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法，设定样品水解、衍生处理、上柱检测三个操作步骤，然后针对含乳饮料的特性设定上述三操作步骤所使用的处理试剂及试剂用量及处理参数，使得上述三操作步骤的工艺参数相互严密配合，实现对含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式高精度检测。本发明能够实现对含乳饮料中的γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式检测，且具有极高的灵敏度和优越的稳定性。

主权项

含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的高效液相色谱方法，其特征在于：设定样品水解、衍生处理、上柱检测三个操作步骤，然后针对含乳饮料的特性设定上述三个操作步骤所使用的处理试剂及试剂用量及处理参数，使得上述三个操作步骤的工艺参数相互严密配合，实现对含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式高精度检测；该检测方法包括如下步骤，下述步骤中涉及的重量份均以克为单位计算，涉及的体积份均以毫升为单位计算：A、制备含乳饮料水解样品：取含乳饮料1重量份置于水解管中，加入浓盐酸1‑3体积份或加入6mol/L盐酸10‑15体积份，再加入新蒸馏的苯酚3‑4滴，将水解管放入冷冻剂中，冷冻3min‑5min，充入高纯氮气并在充氮气状态下拧紧螺盖，将水解管放入109‑111℃的恒温干燥箱中，水解20‑30小时后取出冷却，打开水解管，将水解液全部过滤转移到容量瓶中，取滤液1‑2体积份用真空干燥器在40℃‑50℃干燥，蒸干，用0.5‑2体积份0.1mol/L的盐酸溶解，然后采用0.2µm‑0.8µm的滤膜过滤到高效液相色谱进样瓶中；B、水解样品的自动柱前衍生处理：在室温条件下，吸收步骤A所得样品0.5‑2体积份，吸取硼酸缓冲液3‑7体积份，吸取邻苯二甲醛0.5‑2体积份，混匀，再吸取9‑芴基甲基氯甲酸酯0.5‑2体积份，混匀，准备上样；C、高效液相色谱检测γ‑氨基丁酸和16种氨基酸的含量：高效液相色谱的分离条件为，色谱柱：通用的C18液相色谱柱；柱温：40℃；流动相A：1000体积份纯水中加入4‑8重量份结晶乙酸钠，混匀，pH调为7.15‑7.25，再加入3‑5体积份四氢呋喃；流动相B：400体积份纯水中加入6‑12重量份结晶乙酸钠，混匀，pH调为7.15‑7.25，再加入600‑1000体积份乙腈和600‑1000体积份甲醇，混匀；梯度洗脱条件设定如下：序号时间(min)流动相A%流动相B%流速（mL/min）10.00100‑900‑100.8‑1.1227.535‑4555‑650.8‑1.1331.501001.3‑1.643201001.3‑1.653401000.8‑1.1635.5100‑900‑100.8‑1.1检测条件设定如下：检测器采用二极管阵列或紫外检测器；0‑25min，设定检测波长338nm；25‑32min，设定检测波长262nm；32‑35.5min，设定检测波长338nm。