[发明专利]一种采用机械分离法提取骨组织中的成骨细胞的方法

摘要

本发明属于细胞提取分离鉴定领域，具体涉及一种采用机械分离法提取骨组织中的成骨细胞的方法。该方法省略了机械分离法中较难操作的刮骨步骤而采用了涡旋的方法，操作简单，涡旋条件相对固定，得到的碎骨程度相对稳定，可以反复操作，提取结果受操作手法等影响小。与常用的酶消化法或组织块贴壁法提取成骨细胞相比，意外地采用提取破骨细胞的方法提取出了成骨细胞，不仅提取方法简单、重复性好，而且提取出的成骨细胞成活率高、贴壁时间短。

主权项

1.一种采用机械分离法提取骨组织中的成骨细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取出生后3‑5d的大鼠，拉颈处死后消毒，取出放入培养皿中；2)用手术剪剪开其四肢皮肤、肌肉，取股骨、胫骨、肱骨的长骨，放入盛PBS缓冲液的培养皿中，除去骨表面的软组织、骨膜以及软骨，得到长骨干部分，置于盛有少量培养液的培养皿中，用手术剪将骨剪碎；3)将剪碎的骨头及培养液转移至离心管，涡旋震荡使骨碎裂，静置待碎骨片沉降，收集细胞悬液；4)将细胞悬液加入到预先孵育的放有盖玻片的6孔培养板中，在37℃、体积分数为5％的CO2培养箱中培养60min，取出盖玻片用培养液冲洗以除去未附着的细胞，转移至另一块含有预热培养基的6孔培养板中继续培养。