[发明专利]骨髓干细胞的保存及运输方法

摘要

本发明公开了一种骨髓干细胞的保存及运输方法，属于生物技术领域。本发明包括如下步骤：按临床常规取得红骨髓；将骨髓加入5倍体积的PBS，离心，获骨髓细胞；在骨髓细胞中加入PBS轻匀制得悬液；将含海藻糖的分离液加入到离心管中，悬液平铺到分离液上，离心，吸取白膜层细胞；将细胞与冻存液等比例混合分装于冻存管中；先‑80℃冷冻，后转入液氮中冻存；从液氮中取出冻存管立即投入恒温水浴箱中轻轻晃动复融；将复融的细胞悬液移至含有3～7℃生理盐水的离心管中，混匀，离心收集骨髓干细胞；在骨髓干细胞中加入含有0.5％海藻糖的保存液中，使用3～7℃恒温保温箱在24小时内运输至使用单位。本发明使细胞在运输过程中保持活性。

主权项

1.一种骨髓干细胞的保存及运输方法，其特征在于，包括如下步骤：1)按临床常规骨髓穿刺操作取得红骨髓；2)将骨髓加入5倍体积的PBS轻轻混匀稀释，400g，5min离心，弃上清及脂肪层，获骨髓细胞；在骨髓细胞中加入等体积的PBS轻轻混匀制得骨髓细胞悬液；3)将含有海藻糖，超低粘度海藻酸钠的分离液加入到离心管中，所述骨髓细胞悬液平铺到所述分离液上，在8‑25℃，200g‑800g，10～30min条件下离心，吸取白膜层细胞获得骨髓干细胞；4)将所述骨髓干细胞与含有2％海藻糖+8％丙三醇+10％DMSO+18％自体血浆+62％注射用生理盐水的冻存液等比例混合分装于细胞冻存管中；将所述冻存管管口密封置于装有异丙醇的冻存盒中；先于‑80℃冷冻，然后转入液氮中冻存；5)将恒温水浴箱温度调节至37℃～39℃，从液氮中取出冻存管立即投入恒温水浴箱中轻轻晃动复融；将复融的细胞悬液移至含有3～7℃生理盐水的离心管中，混匀，3‑7℃，500g‑800g，10～30min条件下离心收集骨髓干细胞；6)在骨髓干细胞中加入含有0.5％海藻糖的保存液中，调整细胞浓度为1～6×106细胞/ml；检查骨髓干细胞存活率及细菌、内毒素、支原体；进行免疫学检查；移入无菌管或转运袋中，使用3～7℃恒温保温箱在24小时内运输至使用单位；其中，所述分离液的制备方法为：将符合药用标准的右旋糖酐2～3重量份，海藻糖2～4重量份，超低粘度海藻酸钠0.5～0.8重量份，聚二烯丙基二甲基氯化铵0.04～0.1重量份，L‑甲硫氨酸0.003‑0.005重量份和泛影葡胺1～3重量份充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100重量份，再经过0.22μm滤膜过滤制得分离液。