[发明专利]不耐热性核酸外切酶有效
| 申请号： | 201580043582.4 | 申请日： | 2015-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN107109383B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 特里萨·索尔斯塔;伊丽莎白·利尔·安德烈亚森;马里特·圣·洛伦岑;奥拉夫·拉纳;莫滕·埃尔德;阿特勒·诺阿尔夫·拉森;伊冯·彼得罗夫斯基;尼尔斯·彼得·威尔兰森 | 申请（专利权）人： | 阿克蒂克塞姆股份有限公司;特罗姆瑟大学-挪威北极圈大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 宋融冰 |
| 地址： | 挪威特*** | 国省代码： | 挪威;NO |
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| 摘要： | 本发明提供了核酸外切酶或其酶促活性片段，所述核酸外切酶具有SEQ ID No.1的氨基酸序列或与其至少约50％相同的氨基酸序列，其中所述核酸外切酶或其酶促活性片段(i)通过在由10mM Tris‑HCl，在25℃下pH 8.5，50mM KCl和5mM MgCl2组成的缓冲液中在约55℃的温度下加热10分钟而基本上不可逆地失活；(ii)对于单链DNA基本上特异性；和(iii)具有3’‑5’核酸外切酶活性。本发明还提供了其中使用核酸外切酶或其酶促活性片段的从样品中去除单链DNA的方法，核酸扩增方法，逆转录方法和核酸序列分析方法。本发明还进一步提供了编码所述核酸外切酶或其酶促活性片段的核酸以及包含其的试剂盒或组合物。 | ||
| 搜索关键词： | 耐热性 核酸外切酶 | ||
【主权项】：
1.一种从样品中去除单链DNA的方法，所述方法包括在允许消化所述样品中存在的单链DNA量的至少10％的条件下，使所述样品与核酸外切酶接触，并且随后在以下温度下和时间段内加热所述核酸外切酶处理的样品：50℃至55℃下持续至少10分钟；或55℃至65℃下持续5至15分钟；或80℃下持续1至10分钟，以使所述核酸外切酶失活，其中所述核酸外切酶具有选自SEQ ID No.1至5中任一个的氨基酸序列或与其至少99％相同的氨基酸序列，其中具有与SEQ ID No.1至少99％相同的氨基酸序列的所述核酸外切酶来自希瓦氏菌属(Shewanella)；其中具有与SEQ ID No.2至少99％相同的氨基酸序列的所述核酸外切酶来自嗜盐单胞菌属(Halomonas)；其中具有与SEQ ID No.3至少99％相同的氨基酸序列的所述核酸外切酶来自弧菌属(Vibrio)；其中具有与SEQ ID No.4至少99％相同的氨基酸序列的所述核酸外切酶来自嗜冷单胞菌属(Psychromonas)；并且其中具有与SEQ ID No.5至少99％相同的氨基酸序列的所述核酸外切酶来自莫里特拉菌属(Moritella)；并且其中所述核酸外切酶(i)通过在由10mM Tris‑HCl，在25℃下pH 8.5，50mM KCl和5mM MgCl2组成的缓冲液中在55℃的温度下加热10分钟而至少90％不可逆地失活；(ii)针对双链DNA的活性等于或小于在相同条件下针对等量单链DNA的活性的15％；和(iii)具有3’‑5’核酸外切酶活性。
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