[发明专利]一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法

摘要

本发明属于细胞培养技术领域，具体是一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法。本发明培养方法中，裸鼹鼠的心肌细胞分离、纯化操作步骤简单，细胞贴壁快、存活率高，细胞培养体系稳定性好，是一种较为理想的裸鼹鼠原代心肌细胞培养方法，基本可以满足医学、生物学、药学和生命科学各研究领域对裸鼹鼠心肌细胞相关实验研究的要求，适宜在一般实验室进行推广应用。

主权项

1.一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法，包括以下步骤：(A)向裸鼹鼠心肌组织中加入胰蛋白酶进行消化1‑2次，弃去上清液；所述的胰蛋白酶浓度为0.08％(w/v)，采用0.25％(w/v)胰蛋白酶和D‑hank’s溶液按照体积比1:2混合均匀配制而成；(B)在步骤(A)中所得的细胞沉淀中，加入混合消化液，轻轻吹打心肌组织悬液进行消化后，静置；所述的混合消化液为0.125％(w/v)胰蛋白酶和0.3％(w/v)Ⅱ型胶原酶按照体积比2:1混合均匀配制而成，混合消化液中胰蛋白酶终浓度为0.08％(w/v)，Ⅱ型胶原酶终浓度为0.1％(w/v)；(C)收集步骤(B)中的上清液，用200目细胞筛过滤后，立即加入等量终止液终止消化，并于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min；(D)步骤(C)中所得的细胞沉淀，依次重复操作步骤B、步骤C，重复消化次数为6～10次；(E)收集所有细胞于同一离心管中，用终止液重悬细胞，并于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min，弃去上清液，于细胞沉淀中加入终止液重悬细胞，再次于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min，弃去上清液，于细胞沉淀中加入终止液重悬、混匀细胞；(F)将步骤(E)中所得细胞悬液接种于培养容器中，置于培养箱内培养，通过差速贴壁法分离心脏成纤维细胞与心肌细胞；(G)收集步骤(F)中未贴壁的心肌细胞悬液，于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min，所得细胞沉淀用培养基混悬后，置于培养箱内培养；所述的步骤(F)和步骤(G)中培养箱的环境温度为35℃，O2体积浓度为5％、CO2体积浓度为5％。