[发明专利]基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶I的方法有效
| 申请号： | 201610009811.7 | 申请日： | 2016-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN105463007B | 公开（公告）日： | 2018-07-31 |
| 发明（设计）人： | 虞龙;吴奎;吴晓菲;杜玉英 | 申请（专利权）人： | 苏州至汇生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P19/36 |
| 代理公司： | 南京汇恒知识产权代理事务所(普通合伙) 32282 | 代理人： | 王月霞 |
| 地址： | 215000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶I的方法。将烟酰胺核苷激酶基因与pet28a载体连接，构建表达载体，经低能离子束介导作用将表达载体导入大肠杆菌，从而获得产辅酶I重组大肠杆菌，本发明采用离子束介导作用技术将辅酶I合成途径中烟酰胺核苷激酶基因在大肠杆菌中进行重组表达，使重组菌能够多产烟酰胺核苷激酶，从而大幅提高发酵产物辅酶I的含量。在5L发酵罐中其辅酶I产量最高可以达到10.28g/l，具有很高的经济应用价值和产业化前景。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 离子束 技术 构建 重组 大肠杆菌 生产 辅酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶I的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将烟酰胺核苷激酶基因，连接到载体上，构建表达载体；2）将步骤1）的表达载体通过低能离子束介导技术导入大肠杆菌；所述低能离子束介导的能量为14~18KeV，剂量为（80~200）×1014ions/cm2，靶室真空度为（1.0~2.0）×10‑3Pa；所述离子为氮离子；3）利用选择性培养基进行重复筛选，获得可以表达烟酰胺核苷激酶的重组大肠杆菌；4）将重组大肠杆菌接种到发酵培养基中发酵生产辅酶I。
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