[发明专利]一种检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备与应用

摘要

本发明涉及一种检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备与应用，包括以下步骤：S01.对玻碳电极进行预处理；S02.采用循环伏安法制备金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极；S03.分别制备浓度为1～10μM的Ru(bpy)₃²⁺标记的B‑DNA信标，和浓度为1～10μM的二茂铁标记的C‑DNA信标；S04.将所述步骤S02所得到金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的A‑DNA中培育3～6 h，然后依次浸入步骤S03所得Ru(bpy)₃²⁺标记的B‑DNA信标和二茂铁标记的C‑DNA信标20～40min。可以用来检测内切酶EcoRI和ApaI。本发明的传感器具有良好的稳定性、重现、对内切酶EcoRI和ApaI具有很高的特异性，不易收到检测样品中其他物质的干扰；灵敏度极强；而且检测时操作简单方便快速，对抗菌抗病毒药物的研发有一定的帮助。

主权项

1.一种检测内切酶的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S01.对玻碳电极进行预处理；S02.采用循环伏安法制备金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极；S03.分别制备浓度为1～10 μM的 Ru(bpy)32+标记的B-DNA信标，和浓度为1～10 μM的二茂铁标记的C-DNA信标；S04.将所述步骤S02所得到金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的A-DNA中培育3～6 h，然后依次浸入步骤S03所得Ru(bpy)32+标记的B-DNA信标和二茂铁标记的C-DNA信标20～40min，即得到检测内切酶的电化学发光生物传感器；所述巯基修饰的A-DNA序列为5’-SH-(CH2)6-GGGGTTGGGGAAGGGTACGAGGAATTCCGGGTTGGG-3’；所述Ru(bpy)32+标记的B-DNA序列为5’-NH2-(CH2)6-CCCTTCCCCAACCCC-3’；所述二茂铁标记的C-DNA序列为5’-CCCAACCCGG AATTCCT-(CH2)6-NH2-3’；或者所述巯基修饰的A-DNA序列为5’-SH-(CH2)6-GGGGTTGGGGAAGGGTACGAGGATCCGGGTTGGG-3’；所述Ru(bpy)32+标记的B-DNA序列为5’-NH2-(CH2)6-CCCTTCCCCAACCCC-3’；所述二茂铁标记的C-DNA序列为5’-CCCAACCCG GATCCT-(CH2)6-NH2-3’。