[发明专利]一种多酶体系的定向共固定化方法

摘要

本发明公开了一种多酶体系的定向共固定化方法。本发明利用辅基与脱辅基酶间的生物亲和作用，将多酶体系定向共固定化于一个载体上。本发明所具有的优点主要在于实现了多酶体系的高度定向共固定化，更有利于多酶体系酶之间的协同作用，极大地提高了催化效率；定向亲和作用固定化酶比普通吸附法固定化酶活性显著提高，为进一步构建高效率、低成本的生物催化体系提供了一种可行的方法。

主权项

一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，利用带环氧键或羧基的载体材料上的功能基团，与3,5‑二氨基苯甲酸的一个氨基进行反应，将3,5‑二氨基苯甲酸的共价键接到载体材料上，获得接有3,5‑二氨基苯甲酸的载体材料，以S‑(3,5‑DABA)表示；其中3,5‑二氨基苯甲酸与载体材料的质量比为1‑5:2；步骤二，将步骤一得到的S‑(3,5‑DABA)与聚苯胺反应，反应通过S‑(3,5‑DABA)上氨基苯甲酸的氨基与聚苯胺反应，形成共价键，聚苯胺和S‑(3,5‑DABA)的质量比为1‑5:10，获得接有聚苯胺的载体材料，以S‑(3,5‑DABA)‑PANI表示；步骤三，将黄素酶的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸上的氨基，与步骤二所得S‑(3,5‑DABA)‑PANI进行反应，通过S‑(3,5‑DABA)‑PANI上苯甲酸的羧基与黄素腺嘌呤二核苷酸的氨基反应，形成共价键，载体材料与黄素腺嘌呤二核苷酸的质量比为1‑5:2，经酰胺键连接，获得接有黄素腺嘌呤二核苷酸的载体，以S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD表示；步骤四，氧化物酶的辅基—氯化血红素上的羧基，与步骤三所得S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD进行反应，通过S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD上的聚苯胺的氨基进行反应，形成共价键，所得产物以S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD‑Hemin表示；用还原剂对产物进行还原处理，还原剂与产物的质量比为8000‑500:5；其中，氯化血红素与S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD的质量比为1:1‑5。步骤五，将脱辅基的黄素酶、脱辅基的过氧化物酶与步骤四中S‑(3,5‑DABA)‑PANI‑FAD进行亲和吸附，脱辅基的脱辅基的黄素酶、脱辅基的过氧化物酶与载体的质量比为1:1：1‑5，获得定向共固定化的多酶体系。