[发明专利]一种多聚体酶‑抗体及其制备方法

摘要

本发明属于医学检测技术领域，特别是涉及一种多聚体酶标联抗体及其制备方法，采用DVS活化的酶，与PAMAM Dendrimer系列具有多分枝有机分子载体聚合后获得多聚体酶；多聚体酶用DVS再度活化，然后与抗体混合孵育，得到球状多聚体酶标联二抗抗体。该方法克服目前使用链状高分子(比如以葡聚糖或多肽)为载体的多聚体酶标联方法的主要缺陷，极大地缩小了多聚体酶的体积，提高抗体上酶标的密度，使单位体积内标联到二抗上的酶的数目大幅度增加。这一方法生产的多聚体酶标联二抗与现有的酶标二抗相比有更高的灵敏度和稳定性。

主权项

一种多聚体酶‑抗体的标联方法，其特征在于：1)将2,000,000U、7.5克过氧化酶在室温下溶解在0.1M、pH8.00、2.0ml的碳酸氢钠缓冲液中，加入0.24ml的DVS，然后在30℃下温和搅拌30分钟；2)将上述反应液经一个50ml的Sephadex G‑25的柱子纯化去除剩余的DVS，纯化在0.1M、pH8.0碳酸氢钠缓冲液中进行，收集棕色的组分，为活化酶；3)将上述活化酶用离心浓缩管浓缩至4.0ml；4)向上述浓缩了的4ml活化酶中，加入144mg PAMAM Dendrimer 5.0，其中活化酶与PANMAM的分子数比例为40:1；将此溶液在30℃下，温和搅拌16个小时；5)将第4)步的反应液经过一个50ml的Sephadex G‑25的柱子纯化，并将溶液转换到0.1M、pH8.0碳酸氢钠缓冲液中，第一个棕色的组分为多聚体过氧化酶；6)将第5)步生产的多聚体过氧化酶浓缩至4.0ml，向此溶液中加入0.24ml DVS，在30℃下温和搅拌3个小时；7)用一个50ml的Sephadex G‑25分离柱子将剩余的DVS去除，纯化采用含有10mM磷酸钠和140mM氯化钠、其pH7.40PBS缓冲液，收集棕色组分，棕色的组分为活化了的多聚体过氧化酶；8)将第7)步生产得到的活化了的多聚体过氧化酶浓缩至4.0ml；9)将80mg经过亲和纯化并且去除了与人免疫球蛋白的交叉反应的羊抗鼠球蛋白，其中羊抗鼠球蛋白加入PBS中，浓度为5mg/ml，pH为7.4；和第8)步所产生的活化了的多聚体过氧化酶混合，使之均匀混合，然后在黑暗中在室温下静止孵育24小时；10)向第9)步试剂中加入0.4g牛血清蛋白以及0.1％的Proclin‑300；11)所生产的球状多聚体过氧化酶－羊抗鼠免疫球蛋白经过稀释之后便可用于免疫组化染色。