[发明专利]DNA甲基化分析中DNA样本重亚硫酸盐处理转化率的评估方法

摘要

本发明属于合成DNA甲基化检测领域，具体涉及一种DNA甲基化分析中DNA样本重亚硫酸盐处理转化率的评估方法。本发明分别以梯度稀释的重亚硫酸盐处理和未处理DNA标准品转化与未转化的DNA的Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。设计人工合成与任何物种无同源性的序列作为样本的参考序列，使用SybrGreen法应用上述方法评估所有物种重亚硫酸盐处理样本的转化效率，并对该检测方法进行可靠性评估，结果显示，该方法能够有效地评估DNA样品重亚硫酸盐的转化效率，为广泛物种DNA甲基化准确分析提供了可靠快捷的方法。

主权项

一种DNA甲基化分析中DNA样本重亚硫酸盐处理转化率的评估方法，包括以下步骤：(1)设计并合成下列DNA标准品及引物：1)标准品1：是指与任何已知物种无同源序列的DNA序列，该序列未经重亚硫酸盐；2)标准品2：是指标准品1中未甲基化的胞嘧啶全部转化为尿嘧啶后的序列；3)引物1：是指根据标准品1的序列设计的用于扩增标准品1的检测引物；4)引物2：是指根据标准品2的序列设计的用于扩增标准品2的检测引物；(2)使用所述引物1和引物2，以所述标准品1与标准品2按照梯度稀释为模板，分别做标准曲线，其中标准曲线以模板的拷贝数CN对应相应的Ct值；(3)将标准品1加入到待检测DNA样本中，(4)将含有标准品1的待检测DNA样本使用重亚硫酸盐进行转化；(5)使用引物1和引物2，以步骤(4)处理后的DNA样本为模板，分别检测样本中标准品1与标准品2的Ct值；再根据步骤(2)中的标准曲线，计算出样本中标准品1与标准品2相应的拷贝数；(6)使用计算公式：重亚硫酸盐处理DNA转化率(％)＝标准品2的拷贝数/(标准品1拷贝数+标准品2拷贝数)×100％，计算转化率。