[发明专利]一种理性设计的酶用于再生ATP的方法

摘要

本发明涉及一种理性设计的酶用于再生ATP的方法。通过序列对比后的理性设计，突变并异源表达出了苜蓿中华根瘤菌来源的多聚磷酸激酶并在其催化下，实现以低聚合度的多聚磷酸盐为磷酸供体再生ATP。与现有的ATP再生的方法相比，本发明中应用的多聚磷酸激酶为常温酶，能与多种酶促反应耦合，该酶能以四聚磷酸盐为磷酸供体，与高聚合度聚磷酸相比，四聚磷酸更常见易得，在简化ATP再生过程的基础上增加了ATP再生的可行性，也降低了ATP再生的成本。PPK酶的活性不受聚磷酸盐浓度的抑制，为工业大规模生产提供了可能性。

主权项

一种通过理性突变一种来自苜蓿中华根瘤菌的多聚磷酸激酶用于再生ATP的方法，其特征在于，包括：步骤1、定点突变苜蓿中华根瘤菌来源的多聚磷酸激酶基因，得到重组质粒，经IPTG诱导表达。步骤2、将细胞破碎后得到的多聚磷酸激酶，在Tris‑HCl缓冲盐体系和辅因子Mg²⁺存在下，以多聚磷酸盐和ADP为底物，多聚磷酸激酶催化生成ATP。