[发明专利]用于检测人类NRAS基因7种突变的探针、引物及试剂盒

摘要

本发明公开了用于检测人类NRAS基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中NM1～NM7的7组引物和探针，每组中突变引物能与NRAS基因保守序列结合，突变ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测NRAS基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对NRAS基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

主权项

用于检测人类NRAS基因7种突变的引物和探针，其特征在于，核苷酸序列如下：NM1：G12C突变突变上游ARMS引物NM1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游引物NW1‑R：SEQ ID NO:3，检测探针NW1‑P：SEQ ID NO:4，阻断探针NW1‑B：SEQ ID NO:5；NM2：G12D突变突变上游ARMS引物NM2‑F：SEQ ID NO:2，突变下游引物NW1‑R：SEQ ID NO:3，检测探针NW1‑P：SEQ ID NO:4，阻断探针NW1‑B：SEQ ID NO:5；NM3：Q61K突变突变上游引物NW2‑F：SEQ ID NO:6，突变下游ARMS引物NM3‑R：SEQ ID NO:7，检测探针NW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针NW2‑B：SEQ ID NO:13；NM4：Q61L突变突变上游引物NW2‑F：SEQ ID NO:6，突变下游ARMS引物NM4‑R：SEQ ID NO:8，检测探针NW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针NW2‑B：SEQ ID NO:13；NM5：Q61R突变突变上游引物NW2‑F：SEQ ID NO:6，突变下游ARMS引物NM5‑R：SEQ ID NO:9，检测探针NW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针NW2‑B：SEQ ID NO:13；NM6：Q61H突变突变上游引物NW2‑F：SEQ ID NO:6，突变下游ARMS引物NM6‑R：SEQ ID NO:10，检测探针NW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针NW2‑B：SEQ ID NO:13；NM7：Q61H突变突变上游引物NW2‑F：SEQ ID NO:6，突变下游ARMS引物NM7‑R：SEQ ID NO:11，检测探针NW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针NW2‑B：SEQ ID NO:13；其中，所述检测探针的核苷酸序列5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；阻断探针的核苷酸序列5’端经过双脱氧修饰，3’端标记有淬灭基团。