[发明专利]一种水中肠道病毒分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种水中肠道病毒分离纯化方法，属于水中病毒分离纯化领域。本发明要解决现有病毒浓缩方法中浓缩样病毒回收率低和单位体积病毒含量低的问题。本发明包括两种方法：第一种方法是Plus-70设备一步分离纯化方法，该方法应用于少量水样；第二种方法是吸附洗脱超滤法，Nanoceram滤膜吸附多聚磷酸盐溶液洗脱结合Plus-70设备进行二次分离纯化方法，该方法应用于大量水样。本发明克服了Plus-70设备过滤堵塞的问题，同时保证洗脱效率和病毒活性，减小了浓缩样本终体积，提高了单位体积内病毒样本含量。

主权项

一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于一种水中肠道病毒分离纯化方法是采用专利号201410234128.4公开的装置进行的，具体步骤如下：步骤一、将水样装入存储罐中，闭合顶盖；步骤二、然后通入氮气调节存储罐内的压力，打开控制阀，使水样通过过滤器流向滤膜支架；步骤三、待水样全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止进样，关闭氮气存储罐，使罐体泄压；步骤四、更换新的存储罐，向新的存储罐中加入1L质量浓度为1％的多聚磷酸钠溶液，通入氮气使存储罐内的压力上升至0.7个标准大气压；步骤五、打开控制阀，使多聚磷酸钠溶液流向滤膜支架进行洗脱，通过放水管收集洗脱液，待全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止洗脱；步骤六、将滤液杯安装于带有样品杯的Plus‑70滤芯上，组装成两套离心杯，然后用去离子水预润洗；步骤七、取步骤五获得的洗脱液120ml分成两等份，然后分别装入两套离心杯的样品杯中，再将两套离心杯对称放置在离心机内，离心10分钟，取出两套离心杯后将两个样品杯分别由滤液杯上取下，弃去两个滤液杯中过滤液；步骤八、重复步骤七直至步骤五收集的洗脱液全部过滤完毕；步骤九、将经步骤八处理后的两个带有样品的Plus‑70滤芯分别与收集杯组装成两套收集装置，然后对称置于离心机中，离心2分钟，然后合并两个收集杯中样本，再用MEM培养基稀释至1mL，移至离心管内‑70℃保藏备用。