[发明专利]用于检测人类TP53基因5种突变的探针、引物及试剂盒

摘要

本发明公开了用于检测人类TP53基因5种突变的探针、引物及试剂盒，其中TM1～TM5的5组引物和探针，每组中突变引物能与TP53基因保守序列结合，突变ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测TP53基因5种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对TP53基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

主权项

1.用于检测人类TP53基因5种突变的引物和探针，其特征在于，核苷酸序列如下：TM1：R175H突变突变上游ARMS引物TM1‑F：SEQ ID NO:2，突变下游引物TW1‑R：SEQ ID NO:1，检测探针TW1‑P：SEQ ID NO:3，阻断探针TW1‑B：SEQ ID NO:4；TM2：R248W突变突变上游引物TW2‑F：SEQ ID NO:5，突变下游ARMS引物TM2‑R：SEQ ID NO:6，检测探针TW2‑P：SEQ ID NO:8，阻断探针TW2‑B：SEQ ID NO:9；TM3：R248Q突变突变上游引物TW2‑F：SEQ ID NO:5，突变下游ARMS引物TM3‑R：SEQ ID NO:7，检测探针TW2‑P：SEQ ID NO:8，阻断探针TW2‑B：SEQ ID NO:9；TM4：R273C突变突变上游ARMS引物TM4‑F：SEQ ID NO:11，突变下游引物TW3‑R：SEQ ID NO:10，检测探针TW3‑P：SEQ ID NO:13，阻断探针TW3‑B：SEQ ID NO:14；TM5：R273H突变突变上游ARMS引物TM5‑F：SEQ ID NO:12，突变下游引物TW3‑R：SEQ ID NO:10，检测探针TW3‑P：SEQ ID NO:13，阻断探针TW3‑B：SEQ ID NO:14；其中，所述检测探针的核苷酸序列5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；阻断探针的核苷酸序列5’端经过双脱氧修饰，3’端标记有淬灭基团。