[发明专利]一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明属法医学技术领域，具体涉及一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒及检测方法。本发明试剂盒由分离包装的复合扩增引物混合物、多重单碱基延伸反应引物混合物、等位基因分型标准物混合物、复合扩增反应混合液、单碱基延伸反应混合液构成。本发明还公开了利用该试剂盒进行检测的方法，包括提取样品核酸、配置反应体系进行扩增、电泳分析步骤。本发明通过单管内的复合扩增反应和多重单碱基延伸反应，利用通用的毛细管电泳平台，可一次性快速、准确地获得生物检材的20个三等位基因SNP遗传标记的分型，确定检材的个体来源，为法医个人识别提供一种新的技术手段。该试剂盒在法医学领域具有良好的应用前景。

主权项

1.一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒，包括分离包装的复合扩增引物混合物、多重单碱基延伸反应引物混合物、等位基因分型标准物混合物、复合扩增反应混合液和单碱基延伸反应混合液及扩增产物纯化试剂；所述的复合扩增反应混合液含有PCR缓冲溶液、氯化镁、dNTPs、DNA聚合酶；所述的扩增产物纯化试剂含有核酸外切酶1及其缓冲溶液和虾碱性磷酸酶及其缓冲溶液；所述的单碱基延伸反应混合液含有DNA聚合酶、缓冲液、氯化镁、荧光标记双脱氧核糖核酸；其特征在于：所述的复合扩增引物混合物包含了20个三等位基因SNP遗传标记的共计40条扩增引物，各条引物的核苷酸序列分别为下表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.40所示：所述多重单碱基延伸反应引物混合物含有20个三等位基因SNP遗传标记的单碱基延伸引物，其核苷酸序列为下表中SEQ ID No.41至SEQ ID No.60所示：序号SNP基因座的RS号各多重单碱基延伸引物序列序列表中的序号1RS2236296CCCAGCATTGGCTGGCSEQ ID No.412RS1150911CCCAGGATATAGCGCAGTTCSEQ ID No.423RS3780889TTACATTAGCATGCACTGAAGGAAASEQ ID No.434RS128009812C‑ATGGCAATCACCCCACCTSEQ ID No.445RS38241688C‑GTTTCAATAGCGCTGTGGTGTCSEQ ID No.456RS201221419C‑GAGTAATCAGACACTCCCCCSEQ ID No.467RS1395824C‑CCGCAGCACACACAGTGAGASEQ ID No.478RS203123726C‑ATTCTTGGCCTGTCTGTTCCTSEQ ID No.489RS225387228C‑CCGGTCATGTAGGAGAGAAGCTCSEQ ID No.4910RS207573134C‑TCGCTCTCGTCTTGGGTTTAASEQ ID No.5011RS380173237C‑CCTAGCCAAAGAAGCAGGCTTASEQ ID No.5112RS229198240C‑CATGGGCTGGGTTAATCTGATTGSEQ ID No.5213RS312071541C‑CCGTGTTTCAGGATCAAACTTAGAGSEQ ID No.5314RS152787547C‑TTCATCGATTCCAGAGTCTTTTCCTSEQ ID No.5415RS207289950C‑TCCTTGGAAAGTTAGAGTCTCTGAGSEQ ID No.5516RS376133460C‑CCCCCAGCGTAGCCAAAGTTASEQ ID No.5617RS46269858C‑AGAAAGGAAGAGTTAGTAGCTTGTGSEQ ID No.5718RS229223463C‑TTTGGTTTCTGCAGCAGCAAATCSEQ ID No.5819RS42371060T‑CCCCCCCCCCCCACACGAGGGGAAACASEQ ID No.5920RS207107169T‑CCCGGTCCTAGGGCTGAAGGSEQ ID No.60所述各序列中“‑”符号前为加尾序列，阿拉伯数字表示其后跟的那个脱氧核糖核苷酸的重复数；所述的等位基因分型标准物混合物由20个三等位基因SNP遗传标记的等位基因分型标准物构成，包括60个荧光素标记DNA片段，对应20个三等位基因SNP遗传标记的所有已知60个等位基因；所述60个荧光素标记DNA片段各自所对应的SNP基因座的RS号、核苷酸序列及标记的荧光素类型如下表所示：所述各序列中“‑”符号前为加尾序列；阿拉伯数字表示其后跟的那个脱氧核糖核苷酸的重复次数；所述的各等位基因复合扩增引物的浓度如下表所示：所述的各等位基因多重单碱基延伸引物的浓度如下表所示：