[发明专利]一种侯钩藤的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种侯钩藤的分子鉴定方法。本发明在首次获得侯钩藤的ITS序列（如SEQ ID NO.1所示）的基础上，以待测样品的总DNA为模板，利用引物ITS5和ITS4扩增得到待测植物的rDNA ITS序列；将rDNA ITS序列与SEQ ID NO.1所示序列进行比对分析，具体是找出匹配后的12位、86位、105位、120位、450位、547位或569位的碱基中的至少2个碱基进行比对，根据比对结果鉴定待测样品是否为侯钩藤。上述位点是侯钩藤区分于钩藤属其他种植物的唯一性位点信息，可在分子生物学水平对侯钩藤进行快速、准确的分子鉴定；为中药钩藤的规范用药、安全用药提供了必要保障。

主权项

1.一种侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.以待测样品的总DNA为模板，利用引物ITS5和ITS4扩增得到待测植物的rDNA ITS序列；S2.将上述rDNA ITS序列与侯钩藤的ITS序列进行比对分析，找出匹配后的12位、86位、105位、120位、450位、547位或569位的碱基中的至少2个碱基进行比对，根据比对结果鉴定待测样品是否为侯钩藤；其中，步骤S2中所述结果鉴定的标准是，当待测样品的ITS区序列出现以下条件：a.120位为A并且547位为T；b.12位为A并且569位没有T的插入；c.105位为C并且86位为T；d.105位为C并且450位为C；当满足a、b、c、d至少一个条件时，判定待测样品是侯钩藤，当待测样品的ITS区序列不符合a、b、c、d中任何一个条件时，判定待测样品不是侯钩藤；其中，步骤S1中所述引物ITS5的序列如SEQ ID NO.2所示，引物ITS4的序列如SEQ ID NO.3所示，所述侯钩藤的ITS序列如SEQ ID NO.1所示。