[发明专利]一种利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法，包括配制培养基、选取外植体、消毒外植体、接种外植体、组培苗培养、配制幼苗移栽培养基、幼苗的分离与移栽。本发明可完成愈伤组织诱导、愈伤组织分化生芽和生根，同时优化了培养基成分，提高了诱导效率，优化了培养基成分，提高了茎节掖芽愈伤组织诱导效率(按最初接种外植体数量计，最高可达88.3％)；采用一次接种培养即可完成三个培养环节(愈伤组织诱导、愈伤组织分化生芽和不定芽生根)，中间不需要进行转接，减少了杂菌污染的机会，提高了成苗率(按最初接种外植体数量计，成苗率超过70％，最高可达73.3％)。

主权项

一种利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法，其特征在于，所述利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法包括：配制培养基：培养基成分包括1×MS营养元素，30g/L蔗糖、7g/L琼脂、2mg/L6‑BA、0.2mg/LIBA；培养基用5mol/L的氢氧化钠调至pH＝5.5～6.5，高温湿热灭菌20～30分钟，后冷却至50℃时，分装在无菌组配瓶内，自然冷却凝固后备用；组培苗培养：将接种的培养瓶密封瓶口，然后放置在25±1℃培养室内先暗培养3天，然后在16h/8h光暗交替下继续培养，在培养的第30天在掖芽基部切口处形成愈伤组织，第50天愈伤组织分化形成丛状新芽，第70天在新芽周围长出新根，形成高3cm的丛状香根草幼苗；所述配制培养基后需要：选取外植体：从生长健壮、无病虫害的香根草基部剪取具4个以上茎节的茎，去除叶、叶鞘和顶芽，在茎节上下1cm处用剪刀剪断，留下带掖芽的茎段作为外植体；消毒外植体：取所修剪后茎段，放入去污液中并浸泡2h，然后用流水清洗浸泡后的茎秆2h；接着在工作台内再依次分别用75％酒精、0.1％升汞和5％的多菌灵浸没茎段消毒0.5、6和10分钟，最后用无菌水冲洗茎段4‑6遍，于无菌滤纸上晾干后备用；接种外植体：取消毒晾干后的茎段，在超净工作台内用无菌剪刀将掖芽基部0.1‑0.3cm以上顶端部分剪去；用无菌解剖刀在茎节基部等距离纵切3个伤口，伤口深度0.1cm，伤口长度均为0.3cm；用无菌镊子将去除掖芽顶端且切伤后的茎段按自然生长方向插入培养基中，扎入深度为茎节基部刚好接触培养基上平面。