[发明专利]一种基于血红素和纳米金簇的蛋白模拟酶制备方法及应用

摘要

本发明提供一种基于血红素和纳米金簇的蛋白模拟酶制备方法及应用，首先采用尿素使牛血清白蛋白变性，然后采用1,4‑二巯基苏糖醇还原剪切牛血清白蛋白得到含巯基的链状牛血清白蛋白，通过与氯化血红素交联制得含巯基的链状牛血清白蛋白‑氯化血红素骨架复合物，进而将其作为稳定剂和还原剂合成纳米金簇，并得到基于血红素和纳米金簇的蛋白模拟酶，具有廉价、催化活性高、稳定好等优点，解决了血红素本身催化活性低、不溶于水、水溶液中易团聚、以及在氧化媒介中结构易被破坏等缺点,扩大了血红素的应用范围。可用于常见食品中H₂O₂含量的快速、高灵敏的检测，检测过程不涉及复杂光电仪器使用，简单易操作，可望在生物催化领域得到广泛的应用。

主权项

1.一种基于血红素和纳米金簇的蛋白模拟酶制备方法，其特征在于，步骤为：1）室温下，将牛血清白蛋白、尿素、EDTA和水混合，搅拌20 min，得浓度分别为7‑10 mg/mL牛血清白蛋白、5‑8 M尿素和1.8‑3.2 mMEDTA的混合液，随后向混合液中加入1,4‑二巯基苏糖醇至浓度为0.08‑0.2 mM，然后在氮气保护下继续搅拌30min，再用去离子水透析10‑14h，得含巯基的链状牛血清白蛋白液，备用；2）室温下，将1‑（3‑二甲氨基丙基）‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、N‑羟基琥珀酰亚胺、氯化血红素和水混合，得浓度分别为90‑120 mM 1‑（3‑二甲氨基丙基）‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、70‑100 mM N‑羟基琥珀酰亚胺和1.5‑3.0 mg/mL 氯化血红素的混合液，20‑25℃搅拌活化1h，然后按照混合液与含巯基的链状牛血清白蛋白溶液体积比1：10加入步骤1）制备的含巯基的链状牛血清白蛋白溶液，在35‑40℃下搅拌1‑3h，再用去离子水透析10‑14h，得含巯基的链状牛血清白蛋白‑氯化血红素溶液；3）将步骤2）制备的含巯基的链状牛血清白蛋白‑氯化血红素溶液与8‑12 mM的四氯金酸水溶液按照体积比10:1混合，搅拌10 min，然后加入1.0 M 的NaOH 水溶液调节混合溶液pH值为10‑12，并在37℃下继续搅拌8‑10h，再用去离子水透析10‑14h，得基于血红素和纳米金簇的蛋白模拟酶。