[发明专利]基于NBDK的定点荧光标记方法有效
| 申请号： | 201610041992.1 | 申请日： | 2016-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN105566440B | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 张贯京;陈兴明;张少鹏;高伟明;李慧玲;潘延超 | 申请（专利权）人： | 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/13 | 分类号： | C07K1/13;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518063 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于NBDK的定点荧光标记方法，通过合成M.Barkeri物种的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶(PylRS)的DNA序列，并将所述DNA序列连接到pBK质粒上；通过采用“饱和突变”的方法，构建了能够在原核和真核生物细胞中表达的M.Barkeri物种的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶突变库Lib‑NBDKRS；通过合成用于定点荧光标记的NBDK，进行筛选和验证。本发明基于NBDK的定点荧光标记方法达到了基于NBD在真核生物(哺乳动物细胞)中实现目的蛋白的红色荧光标记。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 nbdk 定点 荧光 标记 方法 | ||
【主权项】：
一种基于NBDK的定点荧光标记方法，其特征在于，所述基于NBDK的定点荧光标记方法包括如下步骤：S1：获得M.Barkeri PylRS突变库；S2：获得NBDK；S3：筛选特异识别NBDK的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶突变体NBDKRS；S4：在鲸鱼肌红蛋白Myoglobin‑4TAG中插入NBDK，验证筛选得到的NBDKRS能够实现目的蛋白的红色荧光标记。
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