[发明专利]一种米曲霉发酵酶液的提取物及其应用

摘要

本发明属于微生物技术领域，公开了一种米曲霉发酵酶液的提取物及其应用。所述米曲霉发酵酶液的提取物是由米曲霉HML366通过发酵培养，再经过浸提、过滤并离心得到粗酶液，取粗酶液中的上清酶液使用纤维素超滤柱浓缩和阴离子交换层析纯化制备而得。本发明由米曲霉HML366发酵酶液得到的提取物，同时具有葡聚糖外切酶和葡聚糖内切酶活性，酶活性高，耐高温，宽pH耐受范围，可以显著提高纤维素酶系的降解能力，改善纤维素酶系的协同作用。

主权项

1.一种米曲霉发酵酶液的提取物在降解植物纤维素中的应用，其特征在于，所述提取物是由米曲霉HML366通过下述步骤制备得到：（1）将米曲霉HML366的 PDA斜面菌种制成孢子液，取孢子液中孢子于纤维素酶复筛固体培养基中，30℃恒温培养5‑8天；所述纤维素酶复筛固体培养基为：12 g蔗渣，8 g麸皮，60 mL Mandels 营养盐液；（2）在步骤（1）所得培养物中加入150‑250mL无菌重蒸水，40℃恒温水浴1‑2小时，然后浸提、过滤并离心得到粗酶液；（3）收集步骤（2）所得粗酶液中的上清酶液，使用3000Da纤维素超滤柱将所述上清酶液浓缩，浓缩至原来上清酶液1/5体积，再使用阴离子交换层析分离纯化，压力为580 psi，以pH 8.3的0.01 mol/L Tris‑HCl为起始缓冲液，在所述起始缓冲液中添加 1 mol/L的NaCl为洗脱缓冲液，纯化至 NaCl 摩尔浓度为0.27 mol/L时，得到成品；所述浓缩、纯化均在2~4℃进行；所述提取物具有如Seq ID No .1所示的氨基酸序列;所述提取物的149个氨基酸残基具有葡聚糖外切酶CBH1活性，385个氨基酸残基具有葡聚糖内切酶活性。