[发明专利]一种绿色木霉突变株的发酵方法及应用

摘要

本发明公开了一种绿色木霉突变株的发酵方法及应用，所述方法包括：菌株的活化；活化后菌株的孢子悬浮液培养；固体发酵培养基料准备；固体发酵得到绿色木霉突变株的发酵产物，该发酵产物可用于制备防治土传病的药剂。本发明通过筛选出几丁质和微晶羧甲基纤维素作为诱导物进行促进该真菌对几丁质酶和纤维素酶的合成并依该菌的嗜甘蔗糖的特性，以禾本科作物秸秆、畜禽屠宰血为氮源为基料进行发酵，达到既对作物抗病又促进生长，还可实现充分对农牧业宰杀废弃物进行综合利用，减少环境污染，促进经济、社会、生态三个效益协同发展。

主权项

一种绿色木霉突变株的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)液体发酵，包括以下步骤：11)菌株的活化：将经秋水仙碱化学诱变的绿色木霉突变株接种到PDA培养基上培养5～7天，使其菌物活化并适应发酵的新环境；12)活化后菌株的孢子悬浮液培养：取活化后的菌株，接种培养于可在显微镜下显示孢子成熟，用10ml无菌水冲洗活化后的孢子至150ml无菌三角瓶中，然后在恒温摇床上以120r/min振荡20min，使孢子团充分分散后，用血球计数器计数，再以1×10⁸个/ml的接种量接种于一定体积并装有液体培养基的发酵罐中发酵5～7天，得到活化后菌株的孢子悬浮液；在发酵过程中，用0.10～0.25mol NaOH调节pH于4.3～6.5之间；(2)固体发酵，包括以下步骤：21)固体发酵培养基料准备：按照质量百分比计，由碳素38％、氮素4％、磷酸盐矿质元素1％、石碳粉22％、水25％和菌物10％组成；所述的碳素源自含水率均＜10％的甘蔗渣、作物秸秆粉、麦麸、玉米壳粉、碎米糠中的一种或两种以上的混合物；所述的氮素包括无机氮源和有机氮源，无机氮源为尿素、(NH₄)NO₃、NaNO₃、亚硝酸钠和硫酸铵中的一种或两种以上的混合物，有机氮源为蛋白胨、鱼粉和血粉中的一种或两种以上的混合物；所述的磷酸盐矿质元素为KH₂PO₄、K₂HPO₄、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、(NH₄)₂HPO₄和(NH₄)H₂PO₄中的一种或两种以上的混合物；所述的菌物源自步骤(1)中的活化后菌株的孢子悬浮液；所述的血粉的配制：收购集贸市场宰杀后的动物血，倒入蒸煮锅的沸水中，3min即捞出沉淀，粉碎风干或烘干再打成粉末，即为血粉；22)固体发酵：将碳素、氮素、磷酸盐矿质元素、石碳粉按上述比例组合，经充分搅拌，于蒸煮锅或消毒罐在1.13个大气压下高温消毒30min，出料，冷至室温后，按比例加入步骤(1)中活化后菌株的孢子悬浮液，经充分拌匀后，转入大型发酵罐控温发酵5～7天，发酵温度在28±0.5℃，冷风吹干包装，即得绿色木霉突变株的发酵产物。