[发明专利]杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法

摘要

本发明提供了一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法，以杂交兰‘台北小姐’为母本，西藏虎头兰为父本，通过人工授粉获得杂交蒴果，成熟蒴果经果荚预处理、种子播种、种子萌发、根状茎增殖与分化同步进行、壮苗生根、炼苗移栽等繁殖步骤获得杂种后代群体。本发明具有种子萌发率高，成苗数多，成苗时间短，种苗质量好等优点，移栽60d成活率达97.8％，获得的大量后代植株为杂交兰优良新品种(系)的选育奠定物质基础，同时为杂交兰种苗的生产提供一条有效的新途径。

主权项

一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)人工授粉：以杂交兰‘台北小姐’为母本，西藏虎头兰为父本进行杂交，取母本开花后2～4d的花朵，用消毒过的镊子去除唇瓣及柱头上的花粉块，取父本完全张开的花朵的花粉块置放于母本柱头蕊腔内；剪取授粉205d后未开裂的成熟蒴果进行无菌播种；(2)果荚预处理与种子播种：将成熟蒴果进行预处理，然后将成熟蒴果的种子播种于萌发培养基中；所述萌发培养基为1/2MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭1.0g/L+琼脂5.8g/L；(3)种子萌发：将种子接种于所述萌发培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照强度1200Lux±100，光照时间12h/d；(4)根状茎的增殖与分化培养：选择生长状态相近的种子萌发形成的根状茎，在无菌条件下分切成长0.6～0.8cm的切段，接种于1/2MS+6‑BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖20g/L+活性炭1.5g/L+琼脂5.8g/L的增殖与分化培养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100，光照时间12h/d；(5)壮苗生根培养：将根状茎分化形成的2.5～3.5cm的幼苗小心切下，分选后剪除老根，仅留1～2条短嫩新根，接种于MS+6‑BA 1.0mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖25g/L+香蕉泥100g/L+活性炭2.5g/L+琼脂5.8g/L的生根壮苗培养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100，光照时间12h/d；(6)炼苗移栽：待生根苗长至6.0～7.0cm、叶片3～4片、根3～4条时，将瓶苗从培养室移至温室大棚，进行炼苗，继续生长30d，温室大棚遮光率60％，温度保持25±2℃，空气湿度保持60％～70％；出瓶种植前3～5d，打开瓶盖，然后取出小苗，洗净根部培养基，用50％多菌灵可湿性粉剂1000倍稀释溶液浸泡3min，阴凉处自然晾干后种植于发酵过的基质中，用恶霉灵溶液喷灌植株及植料；2d后浇透水，以后按预定周期进行叶面喷水和喷洒0.1％多菌灵杀菌剂。