[发明专利]超顺磁性功能颗粒、磁化红细胞及其临床应用

摘要

本发明提供一种超顺磁性功能颗粒及磁化红细胞，细菌磁颗粒表面天然带有丰富的‑NH2基团，通过一定的化学方法修饰使其活化并与抗红细胞糖蛋白GP A单克隆抗体偶联连接，制备成超顺磁性功能颗粒；在临床血型抗体检测前，将其与红细胞孵育并使其快速磁化，然后进行样本检测，检测过程中，磁力分离取代离心力分离，可为临床提供一种快速、简便的试验方法，并且提供的超顺磁性功能颗粒特别有利于红细胞快速磁化及临床血型抗体检测过程中固相‑液相分离。

主权项

一种超顺磁性功能颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：细菌磁颗粒的制备：1)将趋磁细菌MSR‑1菌株进行扩大培养；a)在培养罐内加入第一培养基，105‑110℃灭菌10min，静置1h后，将趋磁细菌MSR‑1菌株接种到培养罐中，进行第一次培养，获得第一培养液；第一次培养的条件为：起始pH值为5.5‑6，培养温度为28‑30℃，培养时间为3‑5天，摇床转速为250‑300转/分钟，培养过程中通入氧气，通入氧气的方式为：间隔20min，通入50min氧气；b)将第一培养液加入含有第二培养基的培养罐中，无氧状态进行第二次培养；第二次培养的条件为：起始pH值为6.5‑7.0，培养温度为20‑25℃，培养时间为2‑3天，摇床转速为100‑200转/分钟；所述第一培养基由重量份数为5‑10份的谷氨酰胺、1‑3份麦芽糖醇、0.5‑1份泛酸钙、0.5‑1份酪蛋白酸钠、0.2‑0.5份磷酸二氢钾、0.5‑1份月桂酸肌氨酸和1‑2份氯化钠组成；所述第二培养基由重量份数为2‑3份蛋白胨、2‑5份生物素、1‑2份甘氨酸、0.5‑1份酒石酸钠、1‑2份硝酸铵、1‑2份磷酯酰丝氨酸和0.2‑0.5份月桂醇硫酸酯钠组成；2)离心并收集趋磁细菌MSR‑1菌株，用Tris‑HCl缓冲液悬浮，得悬浮液；离心条件为：转速8000‑10000rpm，离心时间5‑10min；3)超声波破碎悬浮液中的细胞；超声波破碎条件为：超声功率250‑350w，超声时间2‑7s，间隔时间2‑7s，超声次数80‑100次，重复3次；4)磁铁吸附破碎后的细胞，静置过夜，弃去上清，用磷酸盐缓冲液重新悬浮吸附到的沉淀，超声波清洗，磁铁再次吸附，弃上清，将吸附到的沉淀用磷酸盐缓冲液悬浮，洗涤3次，即得细菌磁颗粒；超声波清洗条件为：超声功率70‑90w，超声时间2‑7s，间隔时间2‑7s，超声次数40‑60次；a.活化(1)取细菌磁颗粒，加入处理剂搅拌条件下反应，反应完成后将产物洗涤至中性；所述处理剂为体积比是40‑60：1‑3：0.3‑1的无水乙醇、氨水和正硅酸乙酯的混合液；(2)将步骤(1)反应后得到的细菌磁颗粒配成浓度为0.1％～0.3％的溶液，调节溶液pH值至3.0‑5.0，向上述溶液中加入浓度为5‑15％的3‑氨丙基三乙氧基硅烷乙醇溶液中，搅拌条件下反应，反应完成后将产物洗涤至中性，制得经过处理的细菌磁颗粒；(3)取经过处理的细菌磁颗粒，加入偶联剂，搅拌反应，过滤，制得活化后的细菌磁颗粒，所述偶联剂为质量比为1:1‑1.2的EDC和NHS的混合物；b.孵育：将活化后的细菌磁颗粒与抗红细胞糖蛋白GPA单克隆抗体，加入孵育剂，室温孵育，孵育的条件为：140‑160rpm涡旋振荡，室温，反应过夜，所述孵育剂为重量份数比为2:5.5‑7.2的壳聚糖和海藻酸钠的混合物；c.分离：磁铁吸附，洗涤，即得超顺磁性功能颗粒。