[发明专利]一种测定蛋白激酶活性的方法和蛋白激酶抑制剂活性的方法

摘要

本发明公开了一种测定蛋白激酶活性的方法，其主要步骤为：选取一组不同浓度的PKA和同一浓度的ATP进行反应，得到一组PKA反应液，再分别将PKA反应液和Na2MoO4溶液滴加干净的金电极表面后烘干，再分别对金电极进行方波伏安曲线测试，根据伏安曲线得到峰电流，将得到的峰电流与每根金电极对应的PKA浓度做标准曲线；最后根据标准曲线计算不同浓度下PKA的活性。本发明的公开的蛋白激酶抑制剂活性的方法与测定蛋白激酶活性的方法的原理相同。本发明的方法操作简单、灵敏度高、检测范围宽、且检测用时短，同时可推广到其他磷酸水解酶的活性测定，也为高效、快速、低投入地筛选多种有效的PKA抑制剂提供了新的思路。

主权项

1.一种测定蛋白激酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）处理金电极：准备多根金电极并清理干净金电极表面，然后在金电极表面滴加氧化石墨烯溶液，烘干备用；（2）测定蛋白激酶的活性：选取一组不同浓度的蛋白激酶和同一浓度的ATP进行水浴反应，得到一组蛋白激酶反应液，再分别将得到的蛋白激酶反应液和Na2MoO4溶液滴加在步骤（1）处理后的金电极表面，静置后烘干，然后分别对金电极进行方波伏安曲线测试，根据伏安曲线得到峰电流，将得到的峰电流与每根金电极对应的蛋白激酶的浓度做标准曲线；（3）根据所述标准曲线计算不同浓度下蛋白激酶的活性；其中，所述步骤（2）中，所述ATP浓度为50～500μM，Na2MoO4溶液的合适浓度范围为6～10mM；水浴反应的温度35.5～38.5℃，水浴反应的时间为1～2小时，静置的时间为10～30min。