[发明专利]一种抗呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法

摘要

本发明涉及一种抗呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法，呼吸道合胞病毒中和抗体效价大于等于1:900。该制备方法包括：(1)筛选出呼吸道合胞病毒中和抗体效价不低于1:200的特免血浆；(2)将筛选出的高效特免血浆混合；(3)将上述混合血浆采用低温乙醇压滤法分离并结离子交换层析法纯化分离免疫球蛋白组分Ⅱ，经过滤、层析、超滤、配制、低pH孵放灭活病毒、纳米膜过滤去除病毒、分装得到纯度98％～100％的免疫球蛋白。该制备和生产方法得到的呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白抗体效价、纯度和回收率高，可以针对性的呼吸道合胞病毒进行治疗，具有安全、有效等优点。

主权项

1.一种抗呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用中和试验法筛选出呼吸道合胞病毒不低于1:200的中和抗体效价滴度的原料血浆；(2)以筛选后的所述血浆原料制备混合血浆供试品，所述混合血浆中呼吸道合胞病毒中和抗体效价滴度不低于1:500；(3)将所述混合血浆供试品采用低温乙醇压滤法分离结合层析法纯化生产人免疫球蛋白，生产操作压力为0.1～0.2MPa，包括从血浆中分离组分II+III沉淀、从组分II+III中分离组分II、层析、超滤、病毒灭活、配制、分装得到成品；步骤(3)所述免疫球蛋白制备具体步骤包括如下：(A)从血浆中分离组分II+III：将冷冻血浆在温度1～4℃之间融化，离心去冷沉淀，用pH值为4.0的醋酸缓冲液调节血浆pH值到7.0～7.4，加入乙醇使血浆中乙醇的最终浓度为7％～11％，使反应液的最终温度为‑1～‑3℃，离心分离组分I，调节组分I上清液的pH到5.9～6.0，加入乙醇使血浆中乙醇的浓度从8％达到20％，使反应液的最终温度控制在‑2.0℃～‑4.0℃，用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液入另一个反应罐，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分II+III沉淀；(B)将上一步加压过滤后的组分II+III沉淀加入4～6倍量预冷的注射用水溶解，使反应温度控制在0～2.0℃,调节制品的pH值为5.10～5.20，加入乙醇使血浆中乙醇的浓度达到18％，反应液温度最终控制在‑4.5℃～‑5.5℃，用压滤机进行加压过滤分离组分III上清液；将组分III上清液中调节pH值为7.3～7.5，每升溶液补加2.8g氯化钠以提高反应液离子强度；加入乙醇使反应液乙醇的最终浓度为25％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，使其最终温度为‑9.0℃～‑11.0℃，继续搅拌0.5小时，静置1小时后用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液做回收乙醇处理，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分II沉淀，组分II沉淀即为呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的粗制品；(C)将上一步加压过滤后的组分II用0～2℃注射用水溶解5～8小时，溶解温度控制在0℃～2.0℃；将充分溶解的组分II过滤澄清，调节溶液的pH值至6.40～6.80之间，并调节溶液的电导率为1.30～1.50ms/m；采用阴离子交换层析介质二乙氨乙基交联葡聚糖凝胶装填层析柱；用AKTA‑process层析系统控制进液流速，将层析柱用pH值为6.40～6.80的0.03M磷酸盐缓冲液平衡至出液的pH值为6.40～6.80后上样，上样压力不超过1.5kg/cm，收集流出的蛋白峰，上样结束后，用pH值为6.40～6.80的磷酸盐缓冲液冲洗凝胶上的残余蛋白，合并滤过液和后顶液称重，调节溶液pH至3.70～4.00，将调整好的蛋白液通过转接管道抽至清洁的反应罐中；(D)启动超滤器，开始初浓缩，控制温度在2℃～6.0℃之间，蛋白浓度达到5％～8％时，其单位为g/mL，加入2.0℃～6.0℃注射用水,使液蛋白浓度在2％～5％并进行恒体积超滤透析脱盐,超滤透析过程中蛋白液体积保持恒定；透析过程中保持蛋白液pH在3.70～4.00；透析结束后停止加水，将制品浓缩至蛋白浓度达8％以上，用2.0℃～8.0℃注射用水顶洗超滤系统，将顶洗液合并入超滤罐中；(E)向超滤浓缩后的蛋白液加入麦芽糖，补加注射用水，调整浓缩后蛋白液的pH值为3.8～4.4，使最终制品中免疫球蛋白含量为50～55g/L，麦芽糖含量为8％～11％(g/mL)，抗体效价不低于1∶900，用0.22um的滤膜除菌过滤，进行低pH孵育法使制品保持在21℃～25℃下21天进行病毒灭活；(F)在灭菌灭活结束后，通过原液送样检测蛋白含量，向药液中加入注射用水稀释药液的最终蛋白浓度为53g/L，再用纳米膜过滤法进行病毒去除处理，然后进行除菌分装即得成品抗呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白。