[发明专利]一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法

摘要

本发明提供了一种检测胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法。该方法包括：(1)将微生物培养液离心、取上清液；(2)将一部分上清液加热；(3)将经过与未经过热处理的上清液与反应缓冲液混合，35‑45℃反应2‑3小时，终止反应，离心，取上清转移至多孔板，加入强碱溶液，检测450nm吸光值；(4)将450nm吸光值换算为胞外蛋白酶酪蛋白水解活性；胞外蛋白酶的耐热性为经过热处理与未经过热处理的上清液中的胞外蛋白酶酪蛋白水解活性的比值。本发明方法可以同时对微生物胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性进行定量测试，更加精确比较菌株之间的差异，使操作更便捷，节省了培养基，能够实现批量操作并可直接检测菌液上清。

主权项

1.一种同时、批量检测微生物胞外蛋白酶酪蛋白水解活性及耐热性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将微生物培养液离心、取上清液；(2)将一部分步骤(1)所述上清液90‑100℃加热1‑3分钟，得经过热处理的上清液，剩余的步骤(1)所述上清液为未经过热处理的上清液；(3)将步骤(2)中所述经过与未经过热处理的上清液与反应缓冲液按体积比1∶0.5‑1∶2分别混合，所述反应缓冲液的组分为2‑4.5g/L偶氮酪蛋白、25‑45mM吗啉丙磺酸和1.5‑3mM氯化钙，35‑45℃反应2‑3小时，加入1.5‑3M三氯乙酸溶液或三氟乙酸终止反应，离心，取上清转移至多孔板，向所述上清中加入强碱溶液至强碱终浓度为0.2‑0.5M，分别检测450nm吸光值；(4)将步骤(3)所得450nm吸光值分别换算为步骤(2)所述经过热处理与未经过热处理的上清液中的胞外蛋白酶酪蛋白水解活性，所述换算的方法为将样品在450nm处的吸光值减去空白对照在450nm的吸光值得吸光值增值，再将所述吸光值增值换算为每毫升样品每小时的吸光值增值即得所述胞外蛋白酶酪蛋白水解活性；所述胞外蛋白酶的耐热性为所得经过热处理与未经过热处理的上清液中的胞外蛋白酶酪蛋白水解活性的比值。