[发明专利]一种银耳胶原蛋白肽的提取方法

摘要

本发明公开了一种银耳胶原蛋白肽的提取方法，属于胶原蛋白肽制备技术领域。本发明以淀粉和磁性粉末制得固定化蛋白酶，将银耳作为原材料，经预处理后酶解，干燥，从而得到银耳胶原蛋白肽的提取方法。本发明工艺简便，原料易得，在制备过程中避免了漂白剂、氧化剂等化学试剂，对环境无任何污染问题，利用固定化蛋白酶代替游离蛋白酶，降低了生产成本，使得最终制得的蛋白酶产率高达90％以上、纯度高达95％以上，适合大规模应用。

主权项

一种银耳胶原蛋白肽的提取方法，其特征在于具体提取步骤为：（1）称取30～40g可溶性淀粉溶于300～400mL去离子水中，装入带有搅拌器和温度计的1L三口烧瓶中，再加入1～2mL浓度为0.2mol/L氯化亚铁溶液和2～3mL质量浓度为30%双氧水，启动搅拌器以300～400r/min转速进行搅拌；（2）在搅拌过程中滴加35～45mL浓度为1mol/L的烧碱溶液，控制滴加速度使其20～30min内滴加完毕，再将三口烧瓶移入油浴锅，加热升温至100～110℃，保持油浴温度不变，继续搅拌反应3～4h后放入温度为4～6℃冰水浴中，静置沉淀10～12h后过滤得到滤渣，干燥后得到磁性淀粉微球；（3）称取5～10g木瓜蛋白酶和3～5g碱性蛋白酶加入400～500mLpH7.0的磷酸缓冲液中，放置在超声振荡仪中，以100～200W功率超声振荡25～35min后，加入20～30g上述制得的磁性淀粉微球，继续振荡8～10h，将反应液用卧式离心机以8000～9000r/min的转速离心10～15min，分离去除上清液，得到固定化蛋白酶，备用；（4）称取400～500g干银耳放入40～50℃的温水中浸泡1～2h，待其充分溶胀后，用蒸馏水将其表面污物清洗干净，用剪刀将洗净后的银耳剪成1cm×1cm的小块，分别用1～2L浓度为0.2mol/L烧碱和1～2L无水乙醇浸泡1～2天，最后用去离子水冲洗5～7遍，得到预处理后的银耳；（5）将300～400g上述预处理后的银耳装入高压反应釜中，按料液比为1:2向釜内加入去离子水，升高釜内温度至100～200℃并提高压力至0.2～0.3MPa，保温保压处理30～40min后出料；（6）将上述物料移入酶解罐，加入物料总质量1～2%的备用的固定化蛋白酶，用保鲜膜密封罐口后放入恒温箱中，升温至40～50℃，保温酶解6～8h后，在酶解罐周围施加匀强磁场，分离回收磁性固定化蛋白酶，再将酶解液用孔径为0.4～0.5μm的纳滤膜进行过滤，得到大分子胶原蛋白肽滤液，经喷雾干燥后研磨过100目标准筛，即可得到银耳胶原蛋白肽粉末。