[发明专利]一种延胡索快速鉴别方法

摘要

本发明公开了一种延胡索快速鉴别方法，通过针对延胡索的一对特征引物，对延胡索进行快速鉴别，该方法包括以下步骤和条件：(1)将收集的各批供试药材取总DNA；(2)取特征引物P2，P4加无菌水稀释；(3)通过PCR反应程序获得扩增产物；(4)扩增产物与6×Loading buffer混匀后点于琼脂糖凝胶上，置于紫外灯下观察，拍照并保存；(5)照片中显示正品延胡索在200～300bp之间有一条清晰条带，其他伪品在该位置均无条带，阴性无干扰。本发明方法属于快速测定方法，基于PCR技术鉴别延胡索，方法简单、准确，灵敏度高，取样量少、稳定性好、检测速度快、特异性强，非常有利于在制药过程中延胡索药材快速质量控制中的应用。

主权项

1.一种延胡索快速鉴别方法，其特征在于，通过针对延胡索的一对特征引物的聚合酶链式反应，对延胡索进行快速鉴别，该方法包括以下步骤和条件：(1)将收集的各批供试药材，经乙醇擦拭表面，晾干，用液氮冷冻研磨成粉末，取研碎后的粉末60mg，用DNeasy Plant Mini Kit DNA提取试剂盒提取总DNA，备用；(2)取特征引物P2，P4加无菌水稀释成10μmol/μL，备用；(3)PCR扩增：50μl体系中含有浓度为10μmol的P2、P4上下游引物各1μL，模版DNA 2μL，Prime STAR HS聚合酶预混体系25μL，剩余体积用无菌蒸馏水补足；通过PCR反应程序获得扩增产物；(4)取步骤(3)扩增产物5μL，与6×Loading buffer 1.0μL混匀后点于1.5％琼脂糖凝胶上，用1×TAE电泳缓冲液在110V电压恒压电泳20min；取出凝胶，置于紫外灯下观察，并用CAMAG成像系统拍照并保存；(5)步骤(4)所得照片中显示，正品延胡索在200～300bp之间有一条清晰条带，其他伪品在该位置均无条带，阴性无干扰；所述的特征引物P2 5'‑CTGTGGCCCTCCGGGTTT‑3'，P2反转序列5'‑AAACCCGGAGGGCCACAG‑3'，P4 5'‑GAGTCGCCCCCATCCCTCTAC‑3'。