[发明专利]基于转录因子ZEB1在制备促进乳腺癌化疗敏感性的药物中的应用

摘要

一种基于转录因子ZEB1在制备促进乳腺癌化疗敏感性的药物中的应用，即转录因子ZEB1可介导乳腺癌的化疗耐药，通过靶向干预ZEB1可增加乳腺癌对化疗的敏感性。一方面，ZEB1可通过促进DNA损伤修复方式促进乳腺癌的化疗耐药，而这种化疗耐药的产生是通过ZEB1对ATM的调控实现的。另一方面，ZEB1可与P300和/或PCAF形成复合物，该复合物行使了对ATM的调控作用。同时，利用ZEB1‑shRNA慢病毒基因敲减系统，经过对乳腺癌细胞系及体内裸鼠模型，证实了Le‑shZEB1在增强抗肿瘤药物抗肿瘤疗效中的作用，有效的解决了乳腺癌对化疗的耐受问题。本发明为缓解乳腺癌化疗耐药，及增加化疗药物的敏感性等问题的解决提供了新的靶点和治疗策略。

主权项

1.Le‑shZEB1在制备增加乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的药物中的应用，其中所述Le‑shZEB1的制备方法如下：(1)在线设计并合成ZEB1 shRNA序列；(2)将ZEB1 shRNA序列退火后连接至载体质粒pLV‑H1‑EF1α‑puro上，双酶切鉴定目的质粒是否构建成功；其中退火条件为95℃，5分钟；双酶切中的酶为BamH1，Sac1；(3)将上述构建成功的目的质粒，利用Letivirus系统进行病毒包装，并测定病毒滴度，构建Le‑shZEB1：a.将293T细胞以每孔1.0×106个细胞的量铺于6孔板中，待细胞密度达到90％左右时，转染细胞；b.取一无菌的1.5ml离心管，向其中加入7.5μl Lipofectamine2000和250μl Opti‑MEM，温和混匀，室温静置5min；c.取另一无菌的1.5ml离心管，向其中加入1.5μg目的质粒，1.5μg包装质粒和250μl Opti‑MEM，震荡混匀；所述包装质粒为0.5μg Gag‑pol+0.5μg Rev+0.5μgVSV‑G；d.将步骤b的组分和步骤c的组分混合，温和混匀，室温静置20min；e.移去六孔板内的旧培养基，小心加入1ml新鲜的全培养基，并将步骤d的混合液加入到六孔板中，常规培养12‑16小时后换液，每孔加入3ml全培养基；f.换液24小时后收上清并测定滴度，既为Le‑shZEB1。