[发明专利]一种具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架及其制备方法有效
| 申请号： | 201610097449.3 | 申请日： | 2016-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN105641750B | 公开（公告）日： | 2018-06-08 |
| 发明（设计）人： | 葛坚;李康寯;钟秀风 | 申请（专利权）人： | 中山大学中山眼科中心 |
| 主分类号： | A61L27/38 | 分类号： | A61L27/38;A61L27/18;A61L27/50 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510060 广东省广州市越秀区先*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架及其制备方法。它是将GFP基因转染进入hiPSc中，得到携带GFP基因的hiPSc，命名为GFP‑hiPSc，然后将GFP‑hiPSc诱导形成的3D视网膜的神经纤维层消化为单细胞，以该单细胞作为种子细胞经诱导分化培养基重悬后接入包被基质胶Matrigel的聚乳酸‑羟基乙酸聚合物支架上，于诱导分化培养基中进行诱导分化，形成具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架。将GFP‑iRP植入动物眼内，根据其特异性细胞示踪标记追踪移植细胞，可有效观察GFP‑iRP与视网膜的整合情况，为后续进一步研究生物工程视网膜神经支架在体内的迁移、增殖、分化和转归提供了依据和基础。 | ||
| 搜索关键词： | 支架 视网膜神经 生物工程 细胞示踪 诱导分化培养基 视网膜 制备 羟基乙酸聚合物 神经纤维层 特异性细胞 示踪标记 移植细胞 诱导分化 种子细胞 动物眼 基质胶 聚乳酸 包被 整合 植入 重悬 转染 增殖 诱导 迁移 体内 追踪 分化 消化 携带 观察 研究 | ||
【主权项】：
一种具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将GFP基因转染进入hiPSc中，得到携带GFP基因的hiPSc，命名为GFP‑hiPSc，然后将GFP‑hiPSc诱导形成的3D视网膜的神经纤维层消化为单细胞，以该单细胞作为种子细胞经诱导分化培养基重悬后接入包被基质胶Matrigel的聚乳酸‑羟基乙酸聚合物支架上，于诱导分化培养基中进行诱导分化，形成具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架，所述的诱导分化培养基为含有神经营养因子和维持浓度的视网膜分化营养液组成的培养基；所述的诱导分化培养基为：每ml含有bFGF 10ng、BDNF 20ng、CNTF 20ng、N2supplement1ng、非必须氨基酸1ng、肝素2μg，余量为DMEM/F12培养基，所述的DMEM/F12培养基是由DMEM培养基和F12培养基按照体积比1：1混合而成。
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