[发明专利]快速鉴别东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的分子生物学方法

摘要

本发明公开了一种快速鉴别东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的分子生物学方法，属于分子生物学领域。从待测对象中分离提取基因组DNA作为模板；分别以P1引物对和P2引物对进行PCR，得到片段A和B；片段A和B拼接剪切后得到COI基因全序列；依据本发明首次公开的东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别。本发明首次实现了对东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的快速准确分子鉴定，弥补了传统形态鉴定方法的诸多不足。鉴定对象包括动物的静脉血、粪便、毛发或尿液样品，具有准确、迅速、便捷的特点，对于维护生态系统和保护生物多样性具有重要的作用和意义。

主权项

一种快速鉴别东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的分子生物学方法，包括下述顺序的步骤：(1)从待测对象中分离提取基因组DNA；(2)利用两组PCR引物对待测对象的COI基因全序列进行PCR扩增：所述的两组PCR引物的引物序列分别为：P1F：5'‐AACCGAACGCAAATCA‐3'，P1R：5'‐TCTCGGGCTACACTTT‐3'；P2F：5'‐TCCGCTGGCAGGAAACT‐3'，P2R：5'‐CTTTCCACGACCACGCC‐3'；以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，以所述的P1F和P1R为引物对进行PCR，得到片段A PCR产物；以所述的P2F和P2R为引物对进行PCR，得到片段B PCR产物；(3)将扩增良好的片段A PCR产物和片段B PCR产物送生物公司测序后，将片段A和片段B拼接，截去COI基因全序列前后多余的碱基，即得到待测对象的COI基因全序列；(4)依据下表所列的核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别：东白眉长臂猿和北白颊长臂猿的核苷酸序列特征变异位点表中位点的序号以本片段核苷酸位置为基准；表中字母“M”为东白眉长臂猿的简写；字母“J”为北白颊长臂猿的简写；相关的简并碱基代码为R＝(A/G)，Y＝(C/T)。