[发明专利]一种基于GC-MS定量肠道内容物和粪便样本中11种短链脂肪酸的方法

摘要

本发明是一种定量检测小鼠肠内容物和粪便样本中11种短链脂肪酸的方法，属于内源性物质检测技术领域。本发明采用饱和食盐水配制的盐酸溶液酸化，稳定性好的乙酸乙酯萃取及N-叔丁基二甲基甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰胺MTBSTFA衍生化后用气相色谱-质谱联用仪定量小鼠肠内容物和粪便样本中11种短链脂肪酸。该方法准确度、精密度高，检测限低，且定量检测短链脂肪酸种类达到11种，能满足小鼠肠内容物和粪便样本中主要短链脂肪酸测定的检测要求，有助于分析比较正常和肠炎状态下短链脂肪酸的代谢处置规律，观察短链脂肪酸的变化能否表征肠炎的动态，为发现肠炎状态下潜在的生物标志物提供重要依据。

主权项

一种基于GC‑MS的小鼠肠道内容物及粪便中11种短链脂肪酸的定量方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物样本提取方法：收集小鼠肠道内容物或粪便，将样本冻干成粉，称取150mg冻干粉，加入饱和氯化钠溶液配置的1摩尔盐酸酸化样本，后加入含内标乙酸乙酯萃取，将样本放于均质器上研磨混匀，经离心后，取适量上清经硫酸镁干燥两次后，取72uL上清置于密封气相小瓶中，加入18uL衍生化试剂MTBSTFA，旋紧瓶盖，混匀后置于80℃水浴中水浴20分钟，后将样本放于室温衍生化8h，待分析；(2)GC‑MS分析：取步骤(1)所得样本进行GC‑MS检测；GC条件：载气为纯He，流速1.0mL/min，分流进样；色谱柱：Rtx‑5MS，尺寸为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度250℃；升温程序：40℃保持3min，以40℃/min升至60℃，后以10℃/min升至110℃，最后以40℃/min升至250℃，保持1min；MS条件：电子电离EI，电子能量70eV，离子源温度200℃，接口温度220℃，溶剂切除时间为5min，同时切除7.0‑7.6min之间的样品出峰时间，Scan模式扫描范围为30‑300，SIM模式监测为46，55，59，60，71，，74，85，87，116amu；(3)定性和定量分析：通过对比步骤(2)分析所得结果，与11种短链脂肪酸标准品衍生化后的保留时间，以及NIST、WILY等谱库提供的质谱图对照，利用谱图匹配度、特征离子及相应的化合物的保留时间对样本中化合物进行定性分析；用选择离子监测SIM模式对所需测定的短链脂肪酸特征离子峰进行积分，以11种短链脂肪酸特征离子峰的峰面积与相应的内标特征离子峰m/z116的峰面积之比为纵坐标y，短链脂肪酸浓度为横坐标x绘制曲线，通过绘制所得的曲线即可得到小鼠生物样本中11种短链脂肪酸定量检测的结果。