[发明专利]一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体、制备方法及其应用

摘要

本发明调节人结肠肿瘤细胞的表达载体、制备方法及其应用。一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体，它是由C10orf10基因和Pcdna3.1‑HisA载体构建而成。制备方法为(1)获得cDNA(2)将上述cDNA连接到TOPO PCR Blunt载体，转化感受态大肠杆菌，在含青霉素培养LB板中培养，挑取阳性克隆培养，经测序选择正确克隆；(3)C10orf10表达载体的构建。本发明构建了人C10orf10基因过表达载体并公开了它的用途。本发明提供的C10orf10基因过表达载体转染入人结肠癌细胞后能够特异性促进人C10orf10基因的表达，导致肿瘤细胞衰老并抑制肿瘤细胞的增殖。

主权项

1.一种调节人结肠肿瘤细胞的表达载体的应用，其特征是，所述表达载体是由C10orf10基因和Pcdna3.1‑HisA载体构建而成，所述调节为抑制离体人结肠肿瘤细胞的增殖；所述的表达载体的制备方法包括如下步骤：(1)获得cDNA：全长C10orf10基因的开放阅读框采用RT‑PCR法从正常组织的总RNA中获得，然后进行扩增，扩增所用引物为C10orf10‑cF：(SEQ ID NO.3)atgaggtcccggcttctgctcC10orf10‑cR：(SEQ ID NO.4)cggtgatccatgaactctga(2)将上述cDNA连接到TOPO PCR Blunt载体，转化感受态大肠杆菌，在含青霉素LB 培养板中培养，挑取阳性克隆培养，经测序选择正确克隆；(3)C10orf10表达载体的构建抽提正确克隆的质粒，酶切，电泳分离，回收目的片段，连入线性化的pcDNA3.1载体，转化感受态大肠杆菌，在含青霉素LB 培养板中培养，挑取阳性克隆培养，经酶切和测序双鉴定后，保存正确克隆，抽提质粒，即得。