[发明专利]一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法

摘要

本发明公开了一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法。将桑黄子实体粉用超声波辅助热水提取出粗多糖，经乙醇沉淀后，用DEAE离子交换层析分离出酸性多糖组分，然后依次用丙烯葡聚糖凝胶S‑100、S‑200和S‑400层析纯化，收集洗脱峰对应的洗脱液，减压浓缩，冷冻真空干燥获得所述产物。本发明多糖PBPP及其方法，纯度均一，对正常细胞的生长无不良影响，对人宫颈癌细胞HELA和人胃癌细胞SGC‑7901的生长均有明显抑制作用，可用于抗癌产品的开发。

主权项

1.一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP的制备方法，其特征在于：1)选取生长于桑树上的桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，粉碎机粉碎后过80-100目筛，得到桑黄子实体粉末；2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖；3)将粗多糖用乙醇进行沉淀；4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离，得到酸性多糖组分；5)依次通过Sephacryl S-100层析柱、Sephacryl S-200层析柱和Sephacryl S-400层析柱纯化洗脱后，收集洗脱峰的洗脱液，得到多糖组分取名为PBPP；所述步骤2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖的具体方法为：2.1)将烘干的桑黄子实体粉末按料液质量体积比为0.04g/mL加入双蒸水，超声波处理35min后，于100℃下提取4.35h后抽滤，获得残渣和滤液；2.2)残渣再重复上述步骤2.1)一次，再次获得残渣和滤液；2.3)合并步骤2.1)和步骤2.2)得到的滤液，在45℃下减压浓缩至原体积的1/4，得到粗多糖液；所述步骤3)用乙醇进行沉淀的具体方法为：往粗多糖液中加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇质量浓度达到80％，置4℃冰箱过夜，10000rpm离心10min，获得乙醇沉淀后的多糖；所述步骤4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离的具体方法为：将乙醇沉淀后的多糖用双蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm离心10min，取上清液，过0.22μm滤膜，上DEAE-Sepharose离子交换层析柱，用0.1M的NaCl溶液以2.5-3.5mL/min流速洗脱，洗脱时采用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到酸性多糖组分；所述步骤5)通过Sephacryl S-100层析柱纯化的具体方法为：将酸性多糖组分用双蒸水溶解配制成5mg/mL溶液，过0.22μm滤膜，上Sephacryl S-100层析柱，用双蒸水以0.5-0.7mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液；所述步骤5)通过Sephacryl S-200层析柱纯化的具体方法为：将所述通过SephacrylS-100层析柱纯化后的多糖溶液，上Sephacryl S-200层析柱，用双蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液；所述步骤5)通过Sephacryl S-400层析柱分离纯化的具体方法为：将所述通过Sephacryl S-200层析柱纯化后的多糖溶液，上Sephacryl S-400层析柱，用双蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到高纯度的多糖组分，取名为PBPP。