[发明专利]11种肠道致病菌核酸多重PCR检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种11种肠道致病菌核酸多重PCR检测试剂盒及其应用，包括有用于扩增如下11种肠道致病菌的引物：霍乱弧菌01群、霍乱弧菌0139群、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠黏附性大肠埃希菌(EAEC)、产毒素大肠埃希菌(ETEC)和大肠埃希菌0157:H7。本发明具有以下优点：本发明所述的试剂盒能够多重检测、灵敏度高且使用快捷方便。此外，本发明采用特异性的引物序列，保证检测结果的可靠性；该检测方法操作简单，省时省力；检测通量大，试剂耗材成本低；对检测平台和人工技术水平要求低，能够在常规检测中广泛推广。

主权项

1.一种11种肠道致病菌核酸多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所检测的菌种及检测的靶标基因包括：霍乱弧菌O1群HlyA基因、CTX基因、rfbN基因，霍乱弧菌O139群HlyA基因、CTX基因、LPSgt基因，沙门氏菌invA基因，志贺氏菌ipaH基因，副溶血弧菌tlh基因、toxR基因，小肠结肠炎耶尔森菌ail基因，大肠埃希菌malB基因，肠致病性大肠埃希菌eae基因，肠侵袭性大肠埃希菌virA基因，肠黏附性大肠埃希菌aggR基因，产毒素大肠埃希菌elt基因、est基因及大肠埃希菌O157:H7rfbE基因；所用引物是在特异性引物的5’端添加一段通用引物序列组合而成的嵌合引物；特异性引物序列为：HlyA基因，SEQ ID NO.1～2；CTX基因，SEQ ID NO.3～4；rfbN基因，SEQ ID NO.5～6；LPSgt基因，SEQ ID NO.7～8；invA基因，SEQ ID NO.9～10；ipaH基因，SEQ ID NO.11～12；tlh基因，SEQ ID NO.13～14；toxR基因，SEQ ID NO.15～16；ail基因，SEQ ID NO.17～18；eae基因，SEQ ID NO.19～20；virA基因，SEQ ID NO.21～22；aggR基因，SEQ ID NO.23～24；elt基因，SEQ ID NO.25～26；est基因，SEQ ID NO.27～28；rfbE基因，SEQ ID NO.29～30及malB基因，SEQ ID NO.31～32；通用引物序列为：SEQ ID NO.33～34；试剂盒组分为：引物混合物A和引物混合物B、阳性对照、阴性对照、酶系、PCR反应缓冲液及DEPC水；其中，引物混合物A为SEQ ID NO.1～18的特异性引物的5’端添加通用引物SEQ ID NO.33～34组合而成的嵌合引物和SEQ ID NO.33～34通用引物，引物混合物B为SEQ ID NO.19～32的特异性引物的5’端添加通用引物SEQ ID NO.33～34组合而成的嵌合引物和SEQ ID NO.33～34通用引物；酶系为热启动DNA聚合酶和UNG酶混合液；其中，通用引物在扩增体系中的终浓度为800nM，嵌合引物在扩增体系中的终浓度为60nM；试剂盒检测的最小样品浓度是103CFU/mL。