[发明专利]一种合浦珠母贝肉抗氧化肽的制备方法有效
| 申请号： | 201610130757.1 | 申请日： | 2016-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN105755030B | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 吴燕燕;马永凯;李来好;杨贤庆;王锦旭;林婉玲;赵永强;戚勃;邓建朝;马海霞;荣辉;胡晓;杨少玲 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院南海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华;刘艳丽 |
| 地址： | 510300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种合浦珠母贝肉抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：(1)根据合浦珠母贝肉抗氧化肽的氨基酸序列，构建出其目的基因，经双酶切后，与同样经双酶切的原核表达质粒PGEX‑6P‑1相连接，制得原核重组表达载体，将原核重组表达载体经热激转化至大肠杆菌感受态细胞，制得重组工程菌株；(2)将重组工程菌株培养，并添加IPTG诱导培养后，离心收集菌体，将菌体超声破碎后收集沉淀，获得含有目的蛋白的沉淀；(3)利用GST琼脂糖亲和层析分离纯化，即得到合浦珠母贝肉抗氧化肽。该方法高效、专一性强、成本低，获得的合浦珠母贝肉抗氧化肽纯度高，抗氧化活性强。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 合浦 珠母 贝肉抗 氧化 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种合浦珠母贝肉抗氧化肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）根据合浦珠母贝肉抗氧化肽PFMAP的氨基酸序列，构建出其目的基因PFMAP，将PFMAP经限制性内切酶Bam HI和Xho I双酶切，与同样经Bam HI和Xho I双酶切的原核表达质粒PGEX‑6P‑1相连接，制得原核重组表达载体PGEX‑6P‑1‑PFMAP，将原核重组表达载体经热激转化至大肠杆菌Rosetta（DE3)感受态细胞，制得重组工程菌株DE3‑PGEX‑6P‑1‑PFMAP；（2）将重组工程菌株DE3‑PGEX‑6P‑1‑PFMAP在已灭菌的含有氨苄青霉素和氯霉素的LB大肠杆菌培养基中培养，添加IPTG诱导培养后，离心收集菌体，将菌体超声破碎后收集沉淀，并用SDS‑PAGE检测，将含有目的蛋白的沉淀备用；（3）利用GST琼脂糖亲和层析分离纯化含有目的蛋白的沉淀，即为合浦珠母贝肉抗氧化肽；步骤（1）中目的基因全长序列如下：5’‑CGCGGATCCATGAATGGTGGTGCAGGTCTGCCTGGTAAACGTGAGCGTAATGGTGGTGCTGGCCTGCCAGGTAAACGTGAACGCAACGGTGGCGCAGGTCTGCCGGGCAAGCGCGAACGTAACGGTGGTGCTGGTCTGCCGGGTAAACGCGAGCGCAACGGTGGTGCGGGTCTGCCTGGCAAACGTGAACGTAATGGTTAACTCGAGCGG‑3’。
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