[发明专利]蛋白酶水解肠粘膜工艺

摘要

本发明涉及一种生物药用原料的制备纯化方法，属于生物工程领域，具体是一种蛋白酶水解肠粘膜工艺。本发明的目的为了改进现有技术的不足而提供一种蛋白酶水解肠粘膜工艺；该发明提供一种简便的低分子肝素钠制备、纯化技术，制得的低分子肝素钠平均分子质量在4．5KDa左右，效价不低于180U／mg，高于中国药典要求的170U／mg，且依据中国药典肝素钠检测标准检测合格。

主权项

一种蛋白酶水解肠粘膜工艺，其具体步骤如下：将粗品肝素钠溶于 NaCl 溶液中，机械搅拌至肝素钠全部溶解，向溶液中加入 碱液直至产生沉淀，静置，过滤除去不溶物，得滤液；将步骤 (1) 中滤液以碱液调 pH 至 9．5— 11，加入 H202 溶液，在 10— 30℃下反应 2．5— 3．5 小时，得反应液；将步骤 (2) 得到的反应液升温至 30— 50℃，此后每隔 2．5— 3．5 小时补加H202 溶液，并调节 pH ；补料后共反应 15— 21h ；向步骤 (3) 得到的反应液中加入吸附剂，磁力搅拌，过滤除不溶物，得滤液；将步骤 (4) 中的滤液通过平衡好的凝胶色谱柱，收集低分子量的肝素钠洗脱；将步骤 (5) 中的低分子量的肝素钠洗脱液用弱碱性离子交换树脂吸附，分别 以三种浓度的 NaCl 溶液洗脱，收集第一种 ( 最低 )、第三种 ( 最高 ) 浓度的 NaCl 洗脱液并 混合；将步骤 (6) 中的混合洗脱液，在磁力搅拌下降温至一 5— 8℃，再用乙醇沉淀、 真空干燥得产品。