[发明专利]一种治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物及其制备和检测方法

摘要

本发明公开了一种治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物及其制备和检测方法，中药复方药材经水提后加入不同配比的营养物和无机盐等，高温灭菌，接入复合肠道益生菌发酵后稳定化处理即得益生菌发酵中药复方组合物；所述的中药复方为：柴胡、黄芩、红参、田基黄、垂盆草、炙鳖甲、丹参、夏枯草、生牡蛎、延胡索、片姜黄、猪苓、炙甘草。本发明还公开了该益生菌发酵中药复方组合物的鉴别和检测方法。实验证明，本发明的益生菌发酵中药复方组合物可以显著提高中药提取物的疗效，提高抑瘤率，在抑制肝脏肿瘤增长方面有显著性作用。本发明可显著提高中药复方提取物的口感，减轻中药提取物对肠胃的刺激性，可以改善患者的胃口，提高患者的体质。

主权项

1.一种治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物的鉴别和检测方法，其特征在于，步骤如下：鉴别方法：（1）取益生菌发酵中药复方组合物5ml，用盐酸调pH至1‑2，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次5ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；取黄芩苷对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2ul、对照品溶液1ul分别点于同一聚酰胺薄膜上，以5：3：1：1的乙酸乙酯‑丁酮‑甲酸‑水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点；（2）取鉴别方法（1）项下供试品溶液为供试品溶液；取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12：2：1：0.8的三氯甲烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同蓝灰颜色的斑点；（3）取益生菌发酵中药复方组合物20ml，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，水浴蒸干正丁醇液，残渣用甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；取柴胡对照药材细粉0.5g，加甲醇30ml，超声提取30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、柴胡对照药材溶液5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以13：7：2的氯仿‑甲醇‑水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点； （4）取益生菌发酵中药复方组合物20ml，用浓氨试液调pH至9‑10，加乙醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至1ml，作为供试品溶液；取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以10：6：1的正己烷‑三氯甲烷‑甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中熏蒸约5分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄绿颜色的荧光斑点；检测方法：A、对照品溶液的制备：称取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml约含0.2mg的溶液，即得；B、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，照紫外‑可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；C、测定法：精密量取本发明的益生菌发酵中药复方组合物5ml，缓缓加入无水乙醇7.5ml，边加边振摇，再加60%乙醇12ml，摇匀，密封，离心，上清液转移至25ml容量瓶中，加少量60%乙醇清洗沉淀并定容至刻度；精密量取10ml加水定容至100ml，摇匀，即得供试品溶液；精密吸取供试品溶液5ml，置25ml容量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取供试品溶液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中芦丁的量，计算，即得；益生菌发酵中药复方组合物中每1ml含总黄酮按芦丁C₂₇H₃₀O₁₆计，不得少于2.8mg；所述的治疗肝癌的益生菌发酵中药复方组合物，是将中药复方药材进行水提后，加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和无机盐，添加或不添加甜味剂，高温灭菌，经益生菌发酵后稳定化处理制成；所述的中药复方由如下重量份的原料药组成：柴胡12‑40重量份、黄芩12‑40重量份、红参4‑24重量份、 田基黄48‑96重量份、垂盆草48‑96重量份、炙鳖甲36‑80重量份、丹参36‑48重量份、夏枯草24‑60重量份、生牡蛎36‑80重量份、延胡索12‑40重量份、片姜黄12‑36重量份、猪苓24‑40重量份、炙甘草8‑36重量份；所述的益生菌选自双歧杆菌和乳杆菌。