[发明专利]通过转基因啮齿类动物制备人源化驼类单域抗体的方法在审
| 申请号： | 201610139563.8 | 申请日： | 2016-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN105777894A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 宋海鹏;李敏;王庆东 | 申请（专利权）人： | 长春力太生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C12N15/89 |
| 代理公司： | 北京市众天律师事务所 11478 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 130103 吉林省长春*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种通过转基因啮齿类动物制备人源化单域抗体的方法。所述方法通过构建人源化羊驼单域抗体人工染色体，制备转基因小鼠，同时采用同源重组的方法敲除小鼠内源性的抗体IgH、IgKappa和IgLamda基因簇，获得只表达人源化羊驼单域抗体的转基因小鼠，并用于制备人源化的单克隆羊驼单域抗体。可以通过杂交瘤或者单细胞PCR筛选的方法直接获得人源化的单域抗体，无需对获得的单域抗体进行体外突变和人源化改造，不需建库筛选，具有简单方便、安全性好的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 转基因 啮齿 类动物 制备 人源化驼类单域 抗体 方法 | ||
【主权项】：
一种通过转基因啮齿类动物制备人源化IgG单域抗体的方法，所述方法包括以下步骤：(1)构建含有人源化IgG抗体VHH区编码序列串联结构的细菌人工染色体DNA；(2)将步骤(1)获得的细菌人工染色体DNA转导入啮齿类动物受精卵雄性原核内；(3)将步骤(2)获得的受精卵移入假孕雌性啮齿类动物身体两侧的输卵管内，使胚胎在代孕母体内发育，经一个完整的发育周期产下子代；(4)鉴定出含有人源化单域抗体基因座的转基因啮齿类动物；(5)将鉴定出的转基因啮齿类动物与采用同源重组方法敲除内源性抗体重链IgH、轻链IgKappa和IgLamda的啮齿类动物杂交，最终获得含有人源化单域抗体基因座，同时内源性抗体重链IgH、轻链IgKappa和IgLamda基因被敲除的人源化单域抗体转基因啮齿类动物；(6)从步骤(5)获得的人源化单域抗体转基因啮齿类动物中获得单克隆单域纳米抗体。
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