[发明专利]一种长爪沙鼠的肝星状细胞的分离和培养方法

摘要

本发明公开了一种长爪沙鼠的肝星状细胞的分离和培养方法，分离方法包括：1)将长爪沙鼠的肝脏，先移入联合酶液中灌注消化，然后去除肝包膜和Glisson鞘，粉碎肝脏呈糊状，再移入混合酶液，搅拌消化，得到搅拌消化后的产物；2)加入第一Hank’s液，过滤，得肝组织；然后加第二Hank’s液，初步离心，得沉淀；用第三Hank’s液重悬沉淀，再向其加入Nycodenz液混匀，再次离心，得浑浊带，浑浊带即为分离得到的肝星状细胞。分离培养方法包括：分离以及培养。本发明方法能够提高肝星状细胞的产量和活率，可以保证HSCs纯度，为进一步研究肝星状细胞在肝损伤后细胞基质的沉积及纤维化的形成奠定了基础。

主权项

1.一种长爪沙鼠的肝星状细胞的分离方法，其特征在于，包括：1）将长爪沙鼠的肝脏，先移入联合酶液中灌注消化，然后去除肝包膜和Glisson 鞘，粉碎肝脏呈糊状，再移入混合酶液，搅拌消化，得到搅拌消化后的产物；所述的长爪沙鼠为生前体重60g；所述的长爪沙鼠的肝脏的获得包括：对刚死亡的长爪沙鼠进行开腹，游离腹主动脉，向游离腹主动脉中灌注预灌注液，取下肝脏，即得到长爪沙鼠的肝脏；所述的预灌注液为4℃、含肝素25 U/ml的Hank’s液；所述的联合酶液，由以下体积百分数的组分组成：0.02%~0.08%的链酶蛋白酶和0.05%~0.2%的胶原酶以及余量的Hank’s液；所述的灌注消化的条件为：37℃灌注消化10min；所述的混合酶液，由以下体积百分数的组分组成：0.02%~0.08%的链酶蛋白酶、0.05%~0.2%的胶原酶、0.0005%~0.003%的DNaseI 以及余量的Hank’s液；所述的搅拌消化的条件为：37℃搅拌消化10～15min；2）向搅拌消化后的产物中加入第一Hank’s液，过滤，得肝组织；然后向肝组织中加第二Hank’s液，初步离心，得沉淀；用第三Hank’s液重悬沉淀，再向其加入20%Nycodenz液混匀，再次离心，得浑浊带，浑浊带即为分离得到的肝星状细胞；所述第一Hank’s液、第二Hank’s液和第三Hank’s液均为4℃Hank’s液。