[发明专利]一种基于Ion Torrent测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法在审
| 申请号： | 201610140822.9 | 申请日： | 2016-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN105696089A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | 杜宝珠;蔡乐靖;钱飞箭;卢灵潇;丁志远;陈帼婧;陈贤丰 | 申请（专利权）人： | 浙江圣庭生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/08;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 318020 浙江省台州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于Ion Torrent测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法，包括多重PCR富集目的片段、引物清除、接头连接、文库扩增、文库检测等步骤。本发明的构建方法采用多对PCR引物对目的片段进行富集扩增，操作简单，成本低，降低了文库的损失，提高了文库构建成功率。本发明的文库构建方法适用于在Ion TorrentTM测序平台上进行BRCA1和BRCA2基因的DNA文库测序使用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 ion torrent 平台 乳腺癌 基因 brca dna 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于Ion Torren测序平台的乳腺癌基因BRCA的DNA文库构建方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)目标区域扩增：将待测样本的DNA以及多重PCR引物，经多重PCR反应，得到第一样本；(2)引物清除：取第一样本与引物清除试剂混合进行反应，得到第二样本；(3)接头连接：将第二样本与接头P1进行接头连接反应，得到第三样本；(4)磁珠纯化：将第三样本进行磁珠纯化，得到第四样本；(5)文库扩增：将第四样本加入扩增酶Mix和扩增引物进行PCR扩增，并进行磁珠纯化，得到目的DNA文库；(6)文库检测：将得到的文库采用Qubit和11～13％的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测文库浓度、文库片段大小及文库质量，即得；所述11～13％的PAGE配方为：水，3～4mL；30％丙烯酰胺，2022～2062μL；5*TBE，1.2～1.8mL；9～11％AP，100～120μL；TEMED，9～11μL。
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