[发明专利]一种测定大豆疫霉菌对大豆品系Chapman（Rps3a）的毒性的分子方法有效
| 申请号： | 201610151245.3 | 申请日： | 2016-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN105603105B | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 崔林开;胡艳红;周洲;李永丽;郑伟 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 张燕 |
| 地址： | 471000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种测定大豆疫霉菌对抗病基因Rps3a（Chapman）毒性的分子方法，包括步骤：提取待检测大豆疫霉菌的基因组DNA，PCR扩增出含无毒基因Avr3a的DNA片段，用限制性内切酶Bpu10I酶切，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳图，如果在250bp‑500bp范围内有2条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株为无毒菌株；如果酶切后电泳图在750bp以下有1条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株为毒性菌株。该方法测定周期短、无中间类型、准确可靠，可高通量测定大豆疫霉菌对抗病基因Rps3a（Chapman）的毒性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 测定 大豆 霉菌 抗病 基因 rps3a chapman 毒性 分子 方法 | ||
【主权项】：
1.一种测定大豆疫霉菌对大豆品系Chapman（Rps3a）的毒性的分子方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、提取待检测大豆疫霉菌的基因组DNA；步骤二、设计特异性引物AVR3A1F/AVR3A1R，以提取的基因组DNA为模版，进行PCR扩增，扩增出含有完整无毒基因Avr3a的DNA片段；所述特异性引物AVR3A1F/AVR3A1R的碱基序列为：AVR3A1F：5ˊ‑ATCGAAGCCATATATCTACAGG‑3ˊ；AVR3A1R：5ˊ‑CCTACTGTATGCAAAGTGATCG‑3ˊ；步骤三、用限制性内切酶Bpu10I酶切扩增出的DNA片段，得到酶切产物；步骤四、对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳图，如果在250bp‑500bp范围内有2条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株相对于大豆品系Chapman（Rps3a）为无毒菌株；如果酶切后在750bp以下只有1条DNA条带，则对应的待检测大豆疫霉菌菌株相对于大豆品系Chapman（Rps3a）为毒性菌株。
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